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目的炎症性肠病是一种慢性、炎症性疾病,临床术后易复发,严重威胁着现代人的生活和健康,目前IBD的病因仍不明确。为了更好地探究IBD的发病机制,开发天然的临床治疗方法,本课题拟利用IL-16基因缺陷小鼠,建立小鼠炎症性肠病模型,探究IL-16在小鼠炎症性肠病发病过程中的作用以及调控机制,为IBD的治疗提供新的研究方向和治疗靶点。方法1.利用C57BL/6小鼠构建IBD模型,采用RT-qPCR、ELISA以及免疫荧光检测IL-16的表达和定位。2.将C57BL/6和IL-16-/-小鼠分别随机分为两组:WT对照组、WT DSS组、IL-16 KO对照组、IL-16 KO DSS组。DSS模型组给予25 g/LDSS饮水7 d,建立IBD模型,对照组给予正常饮水。建模期间记录小鼠体重绘制体质量变化曲线。7 d后,解剖分离小鼠脾脏和全结肠,HE检测结肠组织病理损伤,TUNEL检测结肠组织细胞凋亡。流式细胞术检测腹腔细胞中巨噬细胞的数量和极化情况（F4/80,CD86）,免疫组织化学染色法检测结肠组织中巨噬细胞的分布,RT-qPCR分别检测脾脏和结肠组织中IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1βmRNA的水平,ELISA检测全血以及结肠组织中IL-6、IL-12蛋白水平的变化。3.体外实验验证IL-16对体外巨噬细胞极化的影响,体外分离C57BL/6和IL-16-/-小鼠骨髓细胞,GM-CSF诱导培养7 d诱导成骨髓来源的巨噬细胞,加入LPS和IFN-γ刺激其向M1型巨噬细胞活化。流式细胞术检测培养细胞中巨噬细胞极化水平（CD86,CD11b/TNF-α,CD11b/IL-12p40）,RT-qPCR检测巨噬细胞标志性炎性细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1βmRNA水平,ELISA检测细胞培养上清中IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1β蛋白水平,Western Blot检测P38MAPK、P65NF-κB等相关蛋白磷酸化水平。结果1.建立小鼠炎症性肠病模型,与WT对照组相比,（1）WT DSS组小鼠体重从4天开始显著下降（P<0.05）,小鼠脾脏非正常肿大,结肠红肿萎缩（P<0.01）;（2）脾脏和结肠组织中IL-16 mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）,结肠组织中IL-16蛋白水平均显著高表达（P<0.01,P<0.01）;（3）免疫荧光可见结肠组织结构损伤严重处IL-16高表达（P<0.01）;2.与WT DSS组相比,（1）IL-16 KO DSS组小鼠体质量下降趋势较缓（P<0.01）;（2）HE染色结果显示,IL-16 KO DSS组结肠组织腺体结构较为完整,结肠组织排列较为有序,粘膜下细胞浸润明显减少;（3）TUNEL检测结果显示,IL-16 KO DSS组结肠组织中凋亡细胞明显减少（P<0.01）;（4）流式细胞术检测巨噬细胞结果显示IL-16 KO DSS组小鼠腹腔单细胞悬液中巨噬细胞的数量和极化水平均有大幅度下降（P<0.01,P<0.05）;（5）免疫组织化学染色结果显示IL-16 KO DSS组结肠组织损伤严重部位巨噬细胞浸润明显减少;（6）RT-qPCR检测结果显示IL-16 KO DSS组脾脏组织中IL-6、IL-12、TNF-αmRNA表达显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.05）,IL-16 KO DSS组结肠组织中IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1βmRNA表达显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.01）;（7）IL-16 KO DSS组小鼠全血清中IL-6、IL-12蛋白水平显著降低（P<0.05,P<0.001）,IL-16 KO DSS组小鼠结肠组织中IL-6、IL-12蛋白水平显著降低（P<0.05,P<0.05）。3.体外诱导培养C57BL/6和IL-16-/-小鼠骨髓来源的巨噬细胞,与WT BMDMs组相比,（1）流式细胞术结果显示IL-16 KO BMDMs组巨噬细胞极化水平显著下降（P<0.05）;（2）RT-qPCR检测结果显示IL-16 KO BMDMs组巨噬细胞标志性炎性细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1βmRNA水平明显降低;（3）ELISA检测显示IL-16 KO BMDMs组巨噬细胞细胞培养上清中IL-6、IL-12、TNF-α蛋白表达显著减少;（4）Western Blot检测结果显示IL-16 KO BMDMs组巨噬细胞极化相关通路蛋白NF-κB磷酸化水平降低。结论1.成功构建DSS诱导的小鼠结肠炎模型,IL-16在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中高表达并且加重结肠炎的病理形成;2.IL-16在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中促进巨噬细胞向结肠组织的募集、上调巨噬细胞向M1亚型的极化,并且诱导结肠组织细胞的非正常凋亡;3.体外实验中,IL-16可能通过上调NF-κB蛋白的磷酸化促进M1型巨噬细胞极化水平。