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信号蛋白分子RhoC在肿瘤细胞中的异常表达近年来引起了人们的广泛重视,但现有的研究多集中在RhoC调控肌动蛋白细胞骨架影响肿瘤转移方面,还有许多关键性的问题如RhoC在细胞增殖、凋亡、分化和耐药性等方面的作用知之不多。本课题以人肝癌细胞Bel7402为对象,研究RhoC基因对肝癌细胞生物学行为的影响及其相关的分子机制,为靶向RhoC的肝癌基因治疗奠定理论和实验基础。免疫细胞化学法检测RhoC基因在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达;RNAi基因沉默肝癌细胞RhoC,RT-PCR和Western blot检测基因沉默效果;MTT法、平板克隆和软琼脂克隆形成实验以及AgNOs染色检测细胞增殖;划痕实验和细胞铺展实验检测细胞迁移侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡、细胞膜通透性和线粒体膜电位变化;RT-PCR检测细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白、MMPs表达;明胶酶谱分析检测MMPs活性;测量IC50值评价肝癌细胞化疗药物敏感性;As2O3诱导实验检测肝癌细胞分化水平;基因转染实验观测RhoC高表达所致的正常肝细胞恶性转化倾向。实验结果显示:RhoC在肝癌细胞中表达高于正常肝细胞,基因沉默RhoC可以显著抑制肝癌细胞增殖和转移,促进肝癌细胞大量凋亡,增加肝癌细胞对化疗药物环磷酰胺和长春新碱的敏感性,促进肿瘤细胞分化和诱导分化;RhoC转化正常肝细胞可使之出现恶性变倾向。进一步机理研究揭示:RhoC基因沉默对肝癌细胞增殖的作用可能与其调控Cyclin D1、CDK4表达上调及P16和P21表达下调有关;对肝癌细胞凋亡的作用可能与其调控Bcl-2/Bax基因、增加细胞膜通透性和降低线粒体膜电位有关;对迁移和侵袭的作用与其调控MMP-2和MMP-9基因表达有关。本研究表明,RhoC在肝癌细胞增殖、分化、凋亡、迁移及对化疗药物敏感性等方面起一定的作用,这种作用可能与其调控相关的分子有关。