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目的:本课题通过观察益生菌干预对肥胖小鼠肝脏组织中二酰甘油(DAG)、蛋白激酶C(PKC)的表达情况,进一步探讨益生菌对糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响及其可能机制。方法:(1)C57BL/6N雄性野生型小鼠分别高脂饮食(HFD)或普通饮食(NFD)干预8周后,对小鼠进行称重(WT),评估造模情况。并将造模成功的肥胖小鼠和普通饮食小鼠各自均分为活菌干预组(VSL#3)、灭活菌干预组(Kill-VSL#3)、双蒸水对照组(control),继续干预喂养4周。(2)在益生菌干预第4周末,各组小鼠空腹8小时,内眦静脉采血,促凝管收集小鼠静脉血,检测总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。(3)在益生菌干预第4周末,小鼠禁食8小时,称重并记录,摘取肝脏,取50mg±5mg肝脏组织,将其研磨充分,离心取上清。(4)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠肝脏组织中DAG、PKC的含量。结果:1.经过8周的饮食干预,HFD组WT相较于NFD组小鼠明显增加,差异具有统计学意义(p<0.05);经过4周的益生菌干预,HFD各组(HFD+VSL#3组、HFD+Kill-VSL#3组、HFD+Control组)WT均高于相同活性益生菌干预下的NFD组小鼠,差异具有统计学意义(p<0.05);在相同脂肪含量饮食条件下,HFD+VSL#3组WT水平低于HFD+Control组以及HFD+Kill-VSL#3组小鼠,且差异具有统计学意义(p<0.05);而HFD+Kill-VSL#3组小鼠其WT与HFD+Control组比较则无明显差异(p>0.05);NFD组小鼠在分别给予活性/灭活的VSL#3干预后与NFD+Control组相比较无明显差异(p>0.05)。2.经过12周干预喂养后,HFD各组FBG、FINS、HOMA-IR水平均高于同等活性益生菌干预条件下的NFD组,差异具有统计学意义(p<0.05);经过益生菌干预后,HFD+VSL#3组相较与HFD+Control组以及HFD+Kill-VSL#3组小鼠的FBG、FINS、HOMA-IR水平均有所下降,且差异具有统计学意义(p<0.05);HFD+Kill-VSL#3组与HFD+Control组相比较其FBG、FINS、HOMA-IR水平无明显差异(p>0.05);NFD+VSL#3组FBG、FINS、HOMA-IR水平与NFD+control组及NFD+Kill-VSL#3组相比较则无明显差异(p>0.05)。3.HFD各组相较于相同活性益生菌干预下的NFD组均具有较高水平的血TC、TG,且差异具有统计学意义(p<0.05);经过益生菌干预后,HFD+VSL#3组与HFD+Control组、HFD+Kill-VSL#3组小鼠的TC、TG的水平相比有所下降,差异具有统计学意义(p<0.05);而HFD+Kill-VSL#3组与HFD+Control组比较则无明显变化(p>0.05);NFD组在经过不同活性益生菌干预后与NFD+Control组TC、TG相比无明显差异(p>0.05)。4.HFD各组小鼠肝脏组织中的DAG、PKC水平相比于相同活性益生菌干预下NFD组的水平较高,差异具有统计学意义(p<0.05);在给予益生菌干预后,HFD+VSL#3组小鼠肝脏组织中DAG、PKC的表达水平相较于HFD+Control组以及HFD+Kill-VSL#3组下降(p<0.05);而HFD+Kill-VSL#3组与HFD+Control组比较无明显差异(p>0.05);NFD组在经过不同活性的益生菌干预后其肝脏组织中DAG、PKC水平与NFD+Control组相比较无明显差异(p>0.05)。5.经Pearson分析显示,肝脏组织中DAG与PKC表达呈正相关关系;DAG水平的升高与WT、FBG及HOMA-IR呈正相关;PKC水平的升高与TG、FBG、HOMA-IR呈正相关。结论:(1)高脂饮食可通过上调肥胖小鼠DAG-PKC信号通路引起胰岛素抵抗和脂代谢紊乱的发生;(2)益生菌可通过下调DAG-PKC信号通路改善肥胖介导的胰岛素抵抗;