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研究背景系膜细胞(mesangial cell,MC)是肾小球固有细胞的重要组成部分,其数量、形态和位置在正常情况下均保持相对稳定,对维持肾脏正常结构和功能发挥着重要作用。近年来,系膜细胞的凋亡作为肾脏病变的潜在贡献者越来越受到关注。研究表明醛固酮(aldosterone,ALD)可直接诱导系膜细胞凋亡,进而引起肾脏损伤,但醛固酮如何调节细胞凋亡的机制尚不清楚。本研究通过观察醛固酮、蟾蜍灵(Bufalin)及自噬抑制剂氯喹(CQ)分别作用于大鼠系膜细胞后,细胞自噬与凋亡的变化,探讨系膜细胞自噬与凋亡间的关系,并为临床应用醛固酮受体拮抗剂和蟾蜍灵治疗肾脏疾病提供相应实验基础和理论依据。研究方法1.体外培养大鼠系膜细胞,分别应用醛固酮、蟾蜍灵、氯喹作用于系膜细胞,分为 a:正常对照组,b:ALD 组(10-6 mol/L 醛固酮),c:Bufalin 组(10-8mol/L蟾蜍灵),d:ALD+Bufalin组(10-6 mol/L醛固酮+10-8mol/L 蟾蜍灵),e:ALD+CQ组(10-6mol/[醛固酮+10μmol/L 氯喹),f:ALD+Bufalin+CQ(组(10-6 mol/L醛固酮+10-8mol/L 蟾蜍灵+10μmol/L氯喹)。2.台盼兰拒染法检测不同浓度醛固酮(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)对大鼠系膜细胞的毒性作用。3.应用透射电子显微镜观察各组大鼠系膜细胞的自噬水平。4.应用Western blot检测各组自噬标志蛋白P62、LC3表达的变化。5.应用Annexin V/PI双染流式细胞术检测各组大鼠系膜细胞凋亡的变化。研究结果1.台盼兰拒染法结果显示:醛固酮在10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L浓度对系膜细胞无明显细胞毒作用。2.透射电子显微镜下:对照组与Bufalin组未见典型自噬体,ALD组可见典型自噬体,ALD+Bufalin组自噬体数目小于ALD组,ALD+CQ组和ALD+Bufalin+CQ组自噬体数目均明显高于各组。3.Western blot检测P62、LC3蛋白表达结果显示:对照组与Bufalin组表达量基本相同,ALD组较对照组、Bufalin组升高(P<0.05);ALD+Bufalin组较ALD组下降(P<0.05);ALD+CQ组、ALD+Bufalin+CQ组表达量基本相当,且显著高于各组(P<0.05)。4.流式细胞术检测凋亡结果显示:对照组细胞凋亡率[(46.10±3.49)%]与Bufalin 组[(46.23±5.83)%]基本相同,ALD 组细胞凋亡率[(76.47 ±3.03)%]较对照组明显升高(P<0.05),ALD+Bufalin 组[(61.73 ±2.76)%]、ALD+CQ 组[(61.03 ±3.62)%]及 ALD+Bufalin+CQ 组细胞凋亡率[(60.50 ±1.95)%]基本相同,较对照组和Bufalin明显升高(P<0.05),但较ALD组下降(P<0.05)。研究结论醛固酮可同时诱导系膜细胞自噬及凋亡增加,蟾蜍灵及氯喹可以抑制醛固酮对自噬及细胞凋亡的诱发作用,提示自噬可促进醛固酮诱发的系膜细胞凋亡,醛固酮可能通过增加自噬从而促进系膜细胞凋亡。