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第一章基于生物信息学分析卵巢癌细胞中AK4的表达及意义目的:探究AK4基因在卵巢癌组织的表达情况、潜在功能;并进一步探讨AK4对卵巢癌诊治及预后的影响。方法:利用NCBI数据库检索AK4相关文献;运用GEPIA数据库结合TCGA数据库分析AK4在卵巢癌组织中的表达水平;利用Oncomine数据库及HPA数据库查询AK4在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的差异表达;利用Linked Omics数据库分析TCGA中RNAseq数据及临床相关数据,对AK4做生存分析及AK4差异基因表达分析,并进行GO功能注释和KEGG通路富集分析;同时采用Kaplan-Meier Plotter数据库在线分析AK4与卵巢癌患者预后的相关性;通过STRING查询并绘制AK4相关蛋白网络图,并分析蛋白富集的生理过程。结果:AK4在卵巢癌中呈高表达,但与临床分期不相关;AK4的表达与患者生存率差异无统计学意义;AK4的互作蛋白有ADK、APRT、ADSL等,主要参与核苷酸代谢等生理过程;AK4共表达基因富集于碳代谢、多种糖代谢的通路中。结论:AK4在卵巢癌组织中高表达,并可能通过核苷酸代谢、糖代谢途径参与卵巢癌的发生发展过程,但AK4的表达与患者的临床分期和生存率不相关。第二章AK4基因表达水平与卵巢癌化疗耐药及临床意义的关系分析目的:本章旨在评估人卵巢癌组织中腺苷酸激酶4（AK4）的表达水平,并探讨AK4在卵巢癌化疗耐药及临床意义的关系。方法:收集卵巢癌临床组织样本,制作组织芯片;每位患者进行临床资料收集、随访及疗效判断;采用免疫组织化学法对标本进行染色,半定量综合评分,阳性表达程度结合每个样本的阳性细胞百分率和染色强度;对结果进行统计学分析。结果:和正常组织及良性卵巢肿瘤相比,AK4在人类卵巢癌组织中呈高表达,其他未显示明显相关性。结论:AK4可能参与了卵巢癌的发生和发展,其在卵巢癌中的价值仍值得进一步研究。第三章AK4在卵巢癌细胞铂类耐药中的功能研究目的:探索AK4基因在铂类耐药卵巢癌细胞中的功能。以求为卵巢癌化疗耐药的基因治疗提供理论依据,并寻找卵巢癌基因治疗的潜在靶点。方法:1.卵巢癌铂类耐药细胞的选择:CCK8法检测各卵巢癌细胞细胞系敏感株和耐药株的IC50,计算耐药指数,确定耐药株。2.在卵巢癌耐药细胞株A2780、SKOV3-DDP中,利用慢病毒转染载体构建抑制AK4基因表达的模型细胞,以及利用慢病毒空载体构建相应阴性对照的细胞模型。3.用嘌呤霉素筛选成功转染慢病毒的细胞;用荧光显微镜初步观察转染效果,用Q-PCR和WB法检测转染效果,验证转染慢病毒后卵巢癌细胞中AK4的表达情况。4.以抑制AK4的卵巢癌铂类耐药细胞为研究对象,用CCK8法检测空白组、阴性对照组、实验组细胞的IC50值和增殖情况;平板克隆形成实验检测各组细胞的克隆能力;划痕实验检测各组细胞的横向迁移能力;Transwll法检测细胞的纵向迁移和侵袭能力;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;利用衰老试剂盒检测各组细胞的衰老情况;构建铁死亡模型,利用CCK8实验对细胞活性进行检测、显微镜观察细胞形态学变化。5.裸鼠成瘤实验:将SKOV3-DDP、SKOV3-DDP-NC、SKOV3-DDP-LVSi AK4细胞种植于裸鼠左肩皮下,进行成瘤实验,待成瘤后腹腔注射顺铂治疗8次,每次治疗前用游标卡尺量取瘤体长径和短径,计算肿瘤体积并记录,治疗结束后取出瘤组织。结果:1.CCK8检测细胞IC50,计算耐药指数有意义后,再以慢病毒载体转染卵巢癌耐药株细胞,构建抑制AK4细胞模型（SKOV3-DDP-LV-Si AK4）,转染细胞通过倒置荧光显微镜观察,细胞转染效率达到80%以上。随后Q-PCR和WB结果显示,抑制组细胞AK4表达明显低于空白组和阴性对照组（P＜0.05）,差异有统计学意义。2.与空白组和阴性对照组相比,抑制AK4组细胞IC50明显降低、CCK8检测细胞增殖下降;平板克隆显示,在顺铂作用下,抑制AK4使细胞集落形成明显减少;划痕实验显示抑制AK4组细胞横向迁移能力明显下降,transwell实验显示,抑制AK4组细胞纵向迁移能力和侵袭能力明显降低;流式细胞术检测细胞凋亡结果显示,抑制AK4可以促进细胞凋亡;衰老实验显示,抑制AK4组细胞衰老个数较空白组和阴性对照组多,但整体衰老率不高;铁死亡实验结果提示,耐药细胞可以被诱导剂Erastin诱发铁死亡,抑制AK4后铁死亡更加明显;通过吉姆萨染色,发现诱导剂处理后的细胞形态发生改变,细胞体积变小、胞浆皱缩、细胞核深染。3.抑制AK4的卵巢癌耐药细胞组相较于空白组和阴性对照组成瘤能力明显下降,瘤体生长缓慢,加用顺铂治疗后肿瘤生长更加缓慢,差异有统计学意义。结论:抑制AK4表达可以增加卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,在顺铂作用下,可以明显降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进癌细胞凋亡和衰老,促进卵巢癌细胞铁死亡进程,体内抑制细胞成瘤及肿瘤生长。AK4有望成为卵巢癌铂类耐药后的增敏靶点。