黄曲霉毒素（Aflatoxins, AFT）是黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（A.parasiticus）等产生的一组结构类似的次生代谢产物。其中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, AFB₁）是迄今发现的毒性最大、致癌性最强的一种真菌毒素。调查表明,世界范围内AFT污染十分普遍。因此,AFT受到最广泛的重视,各国政府都制定了十分严格的食品中AFT的限量标准。自20世纪六十年代以来,已逐渐探索出了多种AFT的检测方法。这些方法都曾在各个历史时期为检测AFT作出了一定贡献,但也存在着操作复杂、污染大、对仪器设备要求高、假阳性率高、检测时间长等缺陷。随着时代发展,大部分方法已经不能适应当代社会要求的污染小、灵敏度高、检测时间短及操作简单的检测要求。以免疫分析为基础的准确、快速、无污染、智能化检测技术已成为AFB₁快速检测方法研究的热点。其中免疫亲和层析技术由于其对AFT的提取效率高、净化程度高,越来越受研究人员的推崇,该方法是目前公认的最有效的AFB₁净化方法。而高亲和力、高灵敏度、质量稳定的抗体是建立理想检测方法的前提,是应首先解决的问题。本研究的主要内容包括:抗AFB₁单克隆抗体的制备和特性鉴定及其免疫亲和柱的初步研制。目的:通过杂交瘤细胞技术制备抗AFB₁单克隆抗体,并对所制备的单克隆抗体进行特性鉴定和初步应用。方法:（1）以AFB₁-BSA作为抗原免疫BALB/c小鼠;（2）取免疫效果最佳的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;（3）以AFB₁-OVA作为检测抗原,通过酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测杂交瘤细胞的上清进行筛选,保留阳性孔,用有限稀释法进行三次克隆化,得到能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株;（4）探索大量制备和纯化所得抗体的方法和条件;（5）鉴定对所得单克隆抗体的特性（6）初步应用该单克隆抗体,研制AFB₁免疫亲和柱。结果:（1）得到一株能稳定分泌抗AFB₁单克隆抗体的杂交瘤细胞株5E10。此单克隆抗体的亚类为IgG₂b,亲和常数是4.79×10⁸M^-1,与AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFM₁的交叉反应率分别为<26.06%、63.68%、26.06%、39.26%。（2）单克隆抗体的大量制备采用动物体内生产的方法,即以不完全弗氏佐剂（freund’s incomplete adjuvant, FIA）为致敏剂预处理12周龄以上的BALB/c小鼠。一周内腹腔注射杂交瘤细胞1～5×10⁶个/只,10天后便可采集腹水;辛酸硫酸铵法（CA-AS）适用于该单抗的大量纯化。（3）初步制备AFB₁单抗免疫亲和柱,采用荧光分光光度法确定AFB₁单抗免疫亲和柱的使用条件。使用条件为:5mL 0.01M PBS（pH7.4）平衡;上样缓冲液中甲醇浓度为10%;上样后2mL超纯水洗涤;1mL80%甲醇-水洗脱,20mL0.01M PBS（pH7.4）再生。制备的AFB₁单抗免疫亲和柱其抗体浓度与柱容量的关系为y=85.63x-0.043,其中R²=0.9732。制备柱容量为40ng的免疫亲和柱,使用1次后,柱容量下降至原柱容量的43.6%。结论:杂交瘤细胞株5E10能稳定的分泌目的单克隆抗体,利用该抗体初步研制的AFB₁免疫亲和柱的性能仍需进一步优化。