随着内蒙古地区奶牛和肉牛养殖业的发展,犊牛大肠杆菌病的发病率也随之升高。犊牛大肠杆菌病的持续、反复、难治性感染,是否与大肠杆菌生物被膜的形成有关?大肠杆菌生物被膜阳性菌株对兽医临床上常用的抗菌药物是否敏感?敏感药物对大肠杆菌生物被膜的形成有何作用?是否可以通过调控生物被膜形成相关基因的表达影响大肠杆菌生物被膜的形成?在此背景下,本课题旨在阐明内蒙古地区犊牛源大肠杆菌生物被膜的形成情况和耐药情况,以及生物被膜阳性菌株的敏感药物对生物被膜形成的相关基因lux S、mot A、fli A、pfs和csg D的表达调控作用。本研究采用生化鉴定和分子生物学方法,对采集到的病料进行大肠杆菌分离鉴定;采用改良结晶紫染色法确定大肠杆菌分离株生物被膜的形成能力;采用微量稀释法测定20种抗菌药物对分离菌株的最小抑菌浓度（MICs）,确定分离株敏感药物,选取生物被膜形成能力强且多重耐药的菌株进行后续研究;在96孔板中,采用结晶紫染色法测定强成膜能力菌株的黏附值（B）以及药物对分离株黏附值（B）的影响;使用XTT试剂,测定生物被膜的生长速率以及药物对生物被膜生长速率的影响;利用24孔板和细胞爬片制备生物被膜,使用激光共聚焦倒置显微镜观察分离株生物被膜的形成量以及不同浓度药物对生物被膜形成量的变化;采用QRT-PCR法,检测不同浓度药物对生物被膜形成相关基因lux S、mot A、fli A、pfs和csg D表达量的影响。在104份犊牛病料中,共分离鉴定得到51株大肠杆菌。51株大肠杆菌中,生物被膜形成能力强、中、弱以及无生物被膜形成能力的菌株分别占25.5%（13/51）、17.6%（9/51）、25.5%（13/51）和31.4%（16/51）。药敏试验结果显示,分离株对甲氧苄啶（90.2%）、磺胺嘧啶（78.4%）、四环素（98.0%）、多西环素（70.6%）、氨苄西林（84.3%）、头孢噻吩（68.6%）和头孢噻肟（68.6%）等药物耐药,对头孢西丁（9.8%）和美罗培南（0%）敏感。92.2%（47/51）分离株为多重耐药菌株（耐3类或3类药物以上）,生物被膜阳性株中94.3%（33/35）为多重耐药菌株,其中51.4%（18/35）的菌株耐6类药物。由于生物被膜阳性菌株对头孢西丁敏感,后续试验选取头孢西丁进行研究。选取耐药表型最为复杂的7株生物被膜强阳性菌株作为后续黏附值（B）试验菌株。黏附值（B）试验结果显示,头孢西丁可以极显著降低7株生物被膜阳性菌株的黏附值（B）。由于38号菌株的黏附值最高,成膜能力最强,所以后续研究围绕头孢西丁对38号菌株生物被膜的影响展开。结果显示,头孢西丁能抑制38号菌株的生长速率和生物被膜的形成,抑制效应呈现浓度依赖性。QPCR结果显示头孢西丁在1/2 MIC和MIC处,均极显著下调生物被膜形成的正向调控基因lux S、mot A、fli A、pfs和csg D的m RNA的表达量,因此头孢西丁抑制生物被膜的形成量减少作用可能与头孢西丁下调以上正向调控基因的表达有关。综上所述,犊牛源大肠杆菌生物被膜阳性菌株流行率为68.6%;51株临床分离菌株多重耐药性严重,分离菌株对美罗培南和头孢西丁敏感;头孢西丁可能通过调节luxS、motA、fliA、pfs和csgD的mRNA的表达来抑制生物被膜的形成。