对正常大鼠心肌细胞连接立体结构及连接蛋白表达增龄变化的研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:atang2010
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目的:本研究应用HE 染色、免疫组织化学技术、激光共聚焦显微镜技术及消化扫描电镜技术,对胚胎、新生、幼年、成年、中年及老年正常大鼠左心室心肌细胞闰盘的立体构筑和连接蛋白Connexin43(Cx43)、Connexin(Cx40)、N-cadherin、α-catenin 含量、分布的增龄变化进行了研究,以期为人类心脏发育相关研究提供生物学资料。方法:本实验选取SD 大鼠胎鼠5 只(孕20 天)和出生后雄性SD 大鼠,按年龄分为新生组(出生3~5 天),幼年组(出生20~25 天),体重25±4g;青年组(出生3~4 月),体重250±10g;中年组(出生6~8 月),体重350±10g和老年组(出生13~15 月),体重450±10g,每组各5 只。1、选取上述6 组动物的心脏经主动脉灌流4%多聚甲醛后,常规石蜡包埋,横断面连续系列切片,片厚5μm。HE 染色、免疫组织化学技术结果结合图像分析系统分别检测大鼠心肌Cx43、Cx40、N-cadherin、α-catenin 的表达情况,并计量阳性表达的平均光密度值(OD/um~2)。2、激光扫描共聚焦显微镜技术选取青年组动物,取材方法同前,采用Cx43 标红色荧光、Cx40 标绿色荧光进行荧光双重标记。3、扫描电镜技术选取青年、中年和老年组,心脏样品取心外膜侧0.5×0.5×0.3 cm~3 大小,经6N 氢氧化钠水溶液620C 消化10min,超声波处理1min,常规脱水、干燥、镀膜后进行扫
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