第一部分 慢性髓性白血病细胞来源微泡的生物学特点目的:分析慢性髓性白血病（CML）细胞系K562分泌的微泡（K562-MVs）的生物学特点。方法:采用差异离心法获取K562-MVs。通过蛋白浓度测定法（BCA）评估不同浓度胎牛血清（FBS）的细胞培养条件下,K562-MVs分泌水平的差异;通过透射电子显微镜（TEM）、扫描电子显微镜（SEM）、流式细胞术（FCM）观察K562-MVs形态、大小及尺寸分布;通过蛋白质免疫印迹（WB）分析K562-MVs携带蛋白种类;通过qRT-PCR检测K562细胞特有的BCR-ABL融合基因;通过转录组测序K562-MV和多发性骨髓瘤RPMI8226细胞来源微泡（RPMI8226-MV）中高表达基因,分析K562-MVs基因表达特点。结果:无FBS的细胞培养条件促进K562-MV的分泌;TEM、SEM、FCM结果显示K562-MVs为具有双层膜结构、直径小于1 um的球形囊泡;WB结果证明胞外囊泡（EV）的4种标志性蛋白:CD63、CD81、TSG101和ALIX在K562-MVs中表达阳性;K562-MVs能稳定携带母细胞特异性BCR-ABL融合基因;K562-MVs与RPMI8226-MV携带的高表达基因进行聚类,具有显著共性:主要成分均为核糖体蛋白和假基因（假基因中大部分属于核糖体蛋白家族基因）;次之为氧化还原反应相关的基因;再者为Cytoskeleton,即肌动蛋白、牵丝蛋白以及肌球蛋白构成细胞骨架和细胞收缩的蛋白。结论:本实验室采取的差异离心法能有效获取K562-MV;应激影响K562-MVs的分泌,确保稳定的K562细胞培养环境;K562-MVs具备MVs的一般生物学特征,同时具有K562细胞特异性。第二部分 一种新型BCR-ABL阳性白血病细胞系的建立目的:构建癌性微泡K562-MVs诱导造血干祖细胞（HSPCs）恶性转化的实验体系,建立一株新型的BCR-ABL阳性的白血病细胞系。方法:1)收集健康捐赠者来源骨髓液、健康胎儿脐血、健康供者动员后的外周血采集物,采用磁珠分选的方法获取CD34+造血干祖细胞（hematopoietic stem/pro-genitorcells,HSPCs）,体外培养于适合造血干祖细胞生长的无血清培养基（含细胞因子 SCF、TPO 和 FltL3 各 100 ng/ml,IL-6 20 ng/ml 的 StemSpanTM H3000 培养基）。通过改变诱导体系靶细胞种类、调整HSPCs的培养密度、K562-MVs的作用浓度及频次,观察恶性诱导结局,依此确定MV转化实验体系的最佳参数,实现CD34+HSPC的恶性转化;2)对MVs诱导转化所获得的白血病细胞系（MVs induced Leukemia Cells,MiLC）,通过倒置显微镜、瑞氏-吉姆萨染色、透射电镜、化学染色、流式细胞术、染色体核型分析、荧光原位杂交技术、western blot、qRT-PCR、细胞活性、细胞周期、基因组学、转录组学及蛋白质组学等多种技术方法,研究其生物学特性,并与K562细胞对比研究两者异同。结果:1)构建MV诱导实验体系,成功诱导CD34+ HSPCs发生恶性转化:以CD34+ HSPCs培养密度为4*10^4/ml,K562-MVs处理浓度为1 ug/ml,处理频次2次/天为最佳转化条件;2)建立一种新型BCR-ABL阳性的白血病细胞系MiLC。相较于K562,MiLC在细胞形态学、细胞生物学行为、分子生物学、细胞遗传学、基因组、转录组学及蛋白质组学方面有较多差异。目前该细胞系已在体外传代至P40以上,持续繁殖长达6个月,仍能保持原有生物学特性,稳定携带Ph染色体及BCR-ABL融合基因。结论:K562-MVs能诱导CD34+ HSPCs发生恶性转化;成功构建一株稳定携带Ph染色体和BCR-ABL的新型白血病细胞系MiLC。