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WSSV是目前对虾养殖行业中危害最大的病原体之一,已经造成了巨大的经济损失。自1993年WSSV大规模爆发以来,众多学者已经在对虾抗病毒机制和自身免疫机制方面取得了显著成果。本论文主要就凡纳滨对虾整和素、血蓝蛋白与WSSV的作用及VP28核酸疫苗抗WSSV的效果进行研究,主要研究内容和结果如下:(1)分别提取WSSV感染凡纳滨对虾的鳃,血细胞和类淋巴组织,采用荧光定量PCR法检测各组织中整合素(Integrin)基因mRNA相对表达量,结果表明,在WSSV感染早期(12-48h),Integrin在鳃组织中呈下降趋势;而在血细胞中,WSSV感染12h整合素表达量达到最高;在类淋巴组织中,Integrin随WSSV感染明显上升。(2)将-integrin克隆并表达至载体pBAD/gIIIA中,构成重组载pBAD/gIIIA--integrin。将重组载体转化入大肠杆菌Top10中进行原核表达,纯化得到-integrin蛋白。将蛋白进行DIG标记,分别与含RGD同源模体的WSSV结构蛋白相互作用,Western-blot实验结果显示,-integrin重组蛋白与VP26、VP31、VP37、VP90、VP136这5种蛋白有相互作用,Elisa试验证实了此结果,但含RGD同源模体的VP12不能与-integrin发生作用。为了进一步证明RGD同源模体的作用,人工合成了VP26、VP31、VP37、VP90这4种蛋白的RGD及LDV同源模体,通过Elisa试验证明,这些RGD及LDV同源模体能够有效抑制各自对应的蛋白与-integrin之间的结合。通过同样的方法证明,这些RGD同源模体还能够有效抑制-integrin和WSSV之间的结合。(3)将编码血蓝蛋白75KD亚基的基因序列按其功能分为3段,分别重组至载体pBAD/gIIIA中,构建重组载体pBAD/gIIIA-Hc-N,pBAD/gIIIA-Hc-M,pBAD/gIIIA-Hc-C。将重组载体转化入大肠杆菌Top10中进行原核表达,纯化得到Hc-N、Hc-M、Hc-C3种重组蛋白。将蛋白进行DIG标记,分别与实验室现有的WSSV蛋白相互作用,结果发现,Hc-N可以与VP12、VP26、VP31、VP37发生相互作用,Hc-M与VP12和VP26之间有相互作用,Hc-C可以与VP24、VP26、VP31、VP37相互作用,Elisa试验验证了这一结果。间接免疫荧光法发现,血蓝蛋白的75KD亚基能够和WSSV的结构蛋白-VP24和VP26发生相互作用。(4)将强启动子ie1和病毒结构蛋白VP28基因重组至载体pEGFP-N1中,构建出能在对虾体内高效表达的pEGFP-N1-ie1-vp28核酸疫苗,通过注射质粒和口服灭活菌体两种方式免疫凡纳滨对虾,注射组经过7天免疫期,口服组经过14天免疫期,免疫期取凡纳滨对虾的鳃、肝胰腺、肌肉、类淋巴及血细胞,提取其RNA,将之反转录为cDNA,通过Real-timePCR检测免疫期凡纳滨对虾体内相关免疫基因的表达情况。结果表明,注射和口服vp28组均可在对虾鳃组织中检测到vp28基因表达。在注射组中vp28的相对保护率为22.4%,饲料免疫组中vp28的相对保护率可达到36.84%。相对于对照组,vp28的注射组的STAT基因和Dicer基因表达量于第7天达到最大值。Argonaute基因表达量于第3天达到最大值,以后呈下降趋势。溶菌酶基因表达量一直呈相对较高的趋势。vp28的饲料投喂组的STAT基因和Argonaute基因表达量于第7天达到最大值,以后呈下降趋势。Dicer基因表达量第3天达到最大值。实验结果表明构建的vp28核酸疫苗在对虾抗WSSV防治中具有潜在应用价值。