凡纳滨对虾β整和素、血蓝蛋白与WSSV的作用及VP28核酸疫苗抗WSSV的效果研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaosheng07
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
WSSV是目前对虾养殖行业中危害最大的病原体之一,已经造成了巨大的经济损失。自1993年WSSV大规模爆发以来,众多学者已经在对虾抗病毒机制和自身免疫机制方面取得了显著成果。本论文主要就凡纳滨对虾整和素、血蓝蛋白与WSSV的作用及VP28核酸疫苗抗WSSV的效果进行研究,主要研究内容和结果如下:(1)分别提取WSSV感染凡纳滨对虾的鳃,血细胞和类淋巴组织,采用荧光定量PCR法检测各组织中整合素(Integrin)基因mRNA相对表达量,结果表明,在WSSV感染早期(12-48h),Integrin在鳃组织中呈下降趋势;而在血细胞中,WSSV感染12h整合素表达量达到最高;在类淋巴组织中,Integrin随WSSV感染明显上升。(2)将-integrin克隆并表达至载体pBAD/gIIIA中,构成重组载pBAD/gIIIA--integrin。将重组载体转化入大肠杆菌Top10中进行原核表达,纯化得到-integrin蛋白。将蛋白进行DIG标记,分别与含RGD同源模体的WSSV结构蛋白相互作用,Western-blot实验结果显示,-integrin重组蛋白与VP26、VP31、VP37、VP90、VP136这5种蛋白有相互作用,Elisa试验证实了此结果,但含RGD同源模体的VP12不能与-integrin发生作用。为了进一步证明RGD同源模体的作用,人工合成了VP26、VP31、VP37、VP90这4种蛋白的RGD及LDV同源模体,通过Elisa试验证明,这些RGD及LDV同源模体能够有效抑制各自对应的蛋白与-integrin之间的结合。通过同样的方法证明,这些RGD同源模体还能够有效抑制-integrin和WSSV之间的结合。(3)将编码血蓝蛋白75KD亚基的基因序列按其功能分为3段,分别重组至载体pBAD/gIIIA中,构建重组载体pBAD/gIIIA-Hc-N,pBAD/gIIIA-Hc-M,pBAD/gIIIA-Hc-C。将重组载体转化入大肠杆菌Top10中进行原核表达,纯化得到Hc-N、Hc-M、Hc-C3种重组蛋白。将蛋白进行DIG标记,分别与实验室现有的WSSV蛋白相互作用,结果发现,Hc-N可以与VP12、VP26、VP31、VP37发生相互作用,Hc-M与VP12和VP26之间有相互作用,Hc-C可以与VP24、VP26、VP31、VP37相互作用,Elisa试验验证了这一结果。间接免疫荧光法发现,血蓝蛋白的75KD亚基能够和WSSV的结构蛋白-VP24和VP26发生相互作用。(4)将强启动子ie1和病毒结构蛋白VP28基因重组至载体pEGFP-N1中,构建出能在对虾体内高效表达的pEGFP-N1-ie1-vp28核酸疫苗,通过注射质粒和口服灭活菌体两种方式免疫凡纳滨对虾,注射组经过7天免疫期,口服组经过14天免疫期,免疫期取凡纳滨对虾的鳃、肝胰腺、肌肉、类淋巴及血细胞,提取其RNA,将之反转录为cDNA,通过Real-timePCR检测免疫期凡纳滨对虾体内相关免疫基因的表达情况。结果表明,注射和口服vp28组均可在对虾鳃组织中检测到vp28基因表达。在注射组中vp28的相对保护率为22.4%,饲料免疫组中vp28的相对保护率可达到36.84%。相对于对照组,vp28的注射组的STAT基因和Dicer基因表达量于第7天达到最大值。Argonaute基因表达量于第3天达到最大值,以后呈下降趋势。溶菌酶基因表达量一直呈相对较高的趋势。vp28的饲料投喂组的STAT基因和Argonaute基因表达量于第7天达到最大值,以后呈下降趋势。Dicer基因表达量第3天达到最大值。实验结果表明构建的vp28核酸疫苗在对虾抗WSSV防治中具有潜在应用价值。
其他文献
针对降雨量少,地下水埋藏较深建筑场地提出从控制雨水入渗的角度来考虑避免黄土湿陷性的产生,保证安全性的同时,降低其设计及施工费用。
人类维护动物的权利,从伦理学角度来审视,至少有两个重要理据,其一,这样做是为了维护动物本身的存在价值,更是为了维护人类自身的长远利益和根本利益;其二,人类独有的"同情心
为了减轻城市活性污泥NH,释放对环境的污染,采用逐级驯化的方法从不同样品中分离得到效果好的除氨菌株A1、A2和B1,使活性污泥NH,释放量较对照分别降低了56.73%、31.67%和32.43%。将不同
研究探讨了不同温度、光、pH值、金属离子、糖和有机酸因子处理对天竺葵花色苷的稳定性的影响及保色剂的选择。结果表明:天竺葵花色苷有一定的耐热性,光照加速花色苷降解;对p
<正>LDS,为Laser Direct Structuring的缩写,即激光直接成型,是一种专业镭射加工、射出与电镀制程的3D-MID生产技术,其原理是将普通的塑胶元件/电路板赋予电气互连功能、支撑
啤酒包装对于氧气和二氧化碳的阻隔性有很高的要求,目前满足啤酒包装的主要材料是玻璃瓶、金属罐。PET啤酒瓶是近期研究的热点,通过改性使PET啤酒瓶的阻隔性能有所提高,满足
近年来,对内部控制的探索和研究受到了众多学者的关注,特别是几起举世闻名的企业丑闻的曝光,使得内部控制成为人们讨论的中心话题。不完善的内部控制在企业运行过程中存在着巨大隐患,这不利于企业的可持续发展。我国于2008年和2010年颁布了《企业内部控制基本准则》和《企业内部控制配套指引》,财政部于2013年根据相关法律法规发布了《石化行业内控操作指南》,准则的发布将帮助公司高管在企业行动中采取更严格的内
《型世言》和《金瓶梅词话》都是明代的白话小说,且语料价值极高。一般认为,《型世言》保留了大量明代吴语词,一定程度上反映当时吴语的使用情况;《金瓶梅词话》是以山东方言为背景,反映了明中叶之后的北方口语。本文从二书出发,横向结合同时期的其他语料,纵向参看其他时代语料,两相结合,旨在窥探明代词汇使用的概貌和南北差异问题。本文共分为五个部分:第一部分为绪论。主要介绍论文的研究对象、研究内容、研究现状,以及
质量是水利工程建设的核心要素,其不仅关系到施工单位的经济效益,而且关系到水利工程后期的运行效率。随着水利工程兴建的数量越来越多,对工程质量的要求也越来越高。施工阶
第三方物流企业凭借自身优势为供应链成员提供基础物流服务的同时,逐渐参与到了多个供应链项目的投资和运作之中。而项目运作往往是在多个周期内进行且市场中存在诸多不确定