烟草青枯病是由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌性土传病害,是烟草生产上的毁灭性病害。由于常规防治方法存在种种弊端,根际细菌介导的生物防治正成为备受人们关注的一种有效方法。本实验室筛选到一株拮抗效果较好的短短芽孢杆菌,经二次发酵用于烟草青枯病的防治。并且运用文献报道的引物,建立起10种微生物的荧光定量PCR扩增方法,为快速检测根际微生物群落数量,探索病原茵和拮抗菌在烟草根际的互作效应,从而进一步了解生物有机肥对土壤微生物群落结构的影响提供了可靠的方法。研究结果分述如下：(1)运用文献报道引物分别对细菌、真菌、固氮菌、劳尔氏菌以及硝化细菌等10种微生物进行荧光定量PCR扩增,优化反应条件,绘制标准曲线方程。扩增结果显示建立的荧光定量PCR方法扩增效率达到90%～105%(R2>0.99),符合定量检测要求,引物特异性好,引物浓度适宜,没有引物二聚体干扰,退火温度适宜。(2)分别采用传统的平板计数法与荧光定量PCR法对土壤中已知浓度的劳尔氏菌进行检测,以验证荧光定量PCR方法的相对可靠性。试验结果表明,荧光定量PCR检测速度快,操作简单,检测结果比平板计数结果更接近理论值,且三次试验的重复性比平板计数结果更好,说明荧光定量PCR法检测土壤中微生物具有准确率高、可重复性好等优点,可用于土壤微生物的快速检测。(3)采用盆栽试验的方法,检验生物有机肥对烟草青枯病的防治效果。试验结果表明,施用生物有机肥显著降低了抗病品种K326和感病品种南江三号烟草青枯病的发病率,且还促进了烟草生长,生物量增加14%以上。(4)采用荧光定量PCR方法,研究了生物有机肥处理对盆栽烟草根际青枯病原茵及拮抗茵动态变化的影响。结果表明：只接种病原菌处理(RS)土壤中青枯病原菌的fliC基因拷贝数显著高于先接种病原菌再施用生物有机肥处理(RS+BIO)和先施用生物有机肥后接种病原菌处理(BIO+RS)土壤中fliC基因拷贝数,且这种效应与生育期和品种无关。旺盛生长期前,施用生物有机肥处理土壤中短小芽孢杆菌属拮抗菌的16S rRNA基因拷贝数也显著高于RS处理,说明生物有机肥将大量拮抗菌带入土壤并在根周定殖。(5)2010年在福泉青枯病严重的连作田块上进行了“BIO”功能性微生物肥料的生防试验的研究。大田移栽前施用“BIO"功能性微生物肥料,移栽后不同时期调查烟草青枯病的病情指数,以验证功能性肥料的生防效果。感病品种红花大金元在收获前发病率为100%,所有处理病情指数同对照相当,抗病品种K326所有处理发病较轻,发病率和病情指数间没有差异。抗青枯病性“BIO”微生物肥料在50g/穴剂量下对烟草青枯病没有生防效果。在今后青枯病大田试验中应在控制烟草黑胫病的前提下进行。