研究目的人类转铁蛋白受体(human Transferrin receptor, hTfR)是一种广泛分布于细胞膜的跨膜糖蛋白,通过与转铁蛋白的特异性结合来介导铁的转运,与细胞的生长、增殖、分化等有密切联系。它在大多数成熟的正常细胞中表达水平较低,而在多种肿瘤细胞中过量表达,结合分子探针技术,使得hTfR可以作为比较理想的MR分子影像报告基因。本研究运用hTfR作为MR报告基因,制作包含hTfR蛋白编码区的表达质粒,并对其进行检测鉴定,为下一步体外、体内MR分子影像研究打下基础。方法于Yr基因库中购买包含hTfR基因cDNA的表达质粒,参考Gene-Bank (No. BC001188)的信息合成引物,运用RT-PCR方法对hTfR基因的蛋白编码区进行扩增,经酶切、连接之后构建pcDNA3.1(+)-hTfR的表达质粒,经鉴定及测序正确后按脂质体转染方法瞬时转染Hela细胞,使该细胞过量表达hTfR。运用PCR及Westen-Blot的方法在基因水平和蛋白水平检测hTfR在转染前后的表达水平,鉴定转染效果。结果成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR过表达质粒,测序鉴定正确；通过脂质体法转染Hela细胞,RT-PCR显示转染pCDNA3.1(+)-hTfR质粒组较对照组生成的hTfR mRNA明显增高(P<0.05)；Western-Bolt显示转染组较对照组编码的TfR蛋白明显增高(P<0.05)。结论成功构建了pCDNA3.1(+)-hTfR表达质粒；质粒转染Hela细胞后表达的hTfR mRNA及hTfR蛋白均明显增高；为下一步分子影像学的实验奠定了基础。