【摘 要】
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作为核糖体蛋白S14（RPS14）的重要调控因子,与另一锌指并列蛋白1（JAZF1）会通过维持核糖体亚基组分之间的平衡来调控核糖体的生物合成以及重要蛋白质的翻译。本研究旨在探讨JAZF1和RPS14蛋白在肉鸡腹水综合征（BAS）中的潜在作用。以制备的多克隆抗体为基础,分析了JAZF1和RPS14蛋白在家禽和哺乳动物重要组织中的表达水平和定位分布。本试验利用TA克隆、亚克隆技术构建重组表达质粒PET
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO.32072935）； 江西省自然科学基金（NO.20171ACB21026,20171ACB20012）； 江西现代农业家禽产业技术体系（JXARS）；
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作为核糖体蛋白S14（RPS14）的重要调控因子,与另一锌指并列蛋白1（JAZF1）会通过维持核糖体亚基组分之间的平衡来调控核糖体的生物合成以及重要蛋白质的翻译。本研究旨在探讨JAZF1和RPS14蛋白在肉鸡腹水综合征（BAS）中的潜在作用。以制备的多克隆抗体为基础,分析了JAZF1和RPS14蛋白在家禽和哺乳动物重要组织中的表达水平和定位分布。本试验利用TA克隆、亚克隆技术构建重组表达质粒PET32a-JAZF1和PET28a-RPS14（宿主菌株是:Rosetta和BL21）。之后,将IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导原核表达的His-JAZF1和His-RPS14融合蛋白（30k Da和22 k Da）纯化后作为抗原制备高质量的抗血清。经由酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹法以及间接免疫荧光等技术对多克隆抗体的质量效果、反应原性以及病鸡关键组织中相应蛋白的表达变化进行了分析。试验结果表明:（1）本试验构建了PET32a-JAZF1和PET28a-RPS14表达载体,经由IPTG诱导原核表达,并将获得的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,进而成功提取、分离兔抗鸡JAZF1和RPS14蛋白多克隆抗体。（2）这两种抗体能特异性识别肉鸡重要组织中的JAZF1和RPS14蛋白,其效价分别高达1:102,400和1:204,800。（3）免疫荧光显示JAZF1和RPS14蛋白主要定位于肉鸡、肉鸭、山羊、小鼠和兔子的肺动脉、肝、肾、心和肺组织细胞的细胞质中。（4）通过对平均荧光强度的半定量分析发现这些蛋白在肉鸡和肉鸭的组织中的表达量比在哺乳动物中更加显著（P＜0.01）,说明此类抗血清对家禽具有较高的敏感性和特异性。（5）蛋白质印迹法联合免疫荧光检测结果显示肉鸡腹水综合征会引起组织细胞中JAZF1和RPS14蛋白的表达水平显著降低（P＜0.01或P＜0.05）。总之,本研究通过外源基因的原核表达和动物免疫技术成功制备了兔抗鸡JAZF1和RPS14蛋白多克隆抗体。同时,应用此抗体探究了JAZF1和RPS14蛋白在肉鸡腹水综合征发生发展过程中的表达变化,并定位了两种蛋白在各种动物相关组织中的分布。本文为进一步研究JAZF1和RPS14蛋白在肉鸡腹水综合征中的关键作用奠定了理论基础,也为JAZF1和RPS14蛋白生物学功能研究提供了新的切入点。
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