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δ-冠状病毒(Deltacoronavirus,DCoV)是冠状病毒科的新成员,能够感染哺乳动物和禽类。2012年中国香港首次报道了猪δ-冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV),它能够引起猪只发生呕吐和水样腹泻,严重危害养猪业的健康发展。到目前为止,PDCoV感染宿主细胞的过程尚不清楚,病毒粒子与其特异性受体结合是感染发生的首要条件,因此鉴定出PDCoV的受体,有望从分子水平上阐明PDCoV入侵宿主细胞中分子机制,为新型疫苗研制提供理论支持,同时也为德尔塔冠状病毒的受体研究奠定了基础。不同种属间冠状病毒受体差异较大,本研究根据已有的研究基础,经过合理的推断,以已知的猪冠状病毒受体猪氨基肽酶N(pAPN)和唾液酸分子(Sialic acid)为研究对象,通过对PDCoV非易感细胞乳鼠肾细胞(BHK-21)过表达,及易感细胞猪睾丸细胞(ST)过表达和RNA干扰试验(siRNA),细胞受体阻断试验等进行验证。结果表明pAPN和Sialic acid分子对PDCoV在易感细胞ST中复制并无影响,其不是PDCoV入侵宿主细胞的受体,这为PDCoV致病分子机理的研究带来了新的参考依据。相关研究表明冠状病毒识别相应的受体并成功进入到宿主细胞,是由纤突(Spike,S)蛋白完成的。S蛋白是一种大的I型跨膜糖蛋白,按其功能不同,又将其分为位于N端的S1和位于C端的S2,而S1主要介导病毒与受体分子的结合。PDCoV能感染ST细胞,且能在ST细胞上繁殖,说明ST细胞表面存在PDCo V的受体分子。为进一步筛选鉴定PDCoV的受体,在此理论基础,本研究建立了PDCo V-S1蛋白真核表达纯化系统,使表达的PDCoV-S1蛋白接近天然蛋白的复杂构象,用免疫沉淀法(IP)法钓出ST细胞中与S蛋白相互作用的蛋白,经质谱鉴定筛选到了可能的受体分子,通过对其基因沉默、过表达,我们发现宿主蛋白热休克蛋白90AB1(p HSPCB)在PDCoV感染中起重要作用,结果表明pHSPCB上调表达促进PDCoV复制,p HSPCB被小分子干扰RNA敲低则抑制PDCoV复制,该蛋白有利于PDCoV在易感细胞ST细胞中增殖。本研究揭示了pAPN和Sialic acid不是PDCo V的受体分子,而热休克蛋白90AB1(p HSPCB)能促进PDCoV感染猪睾丸细胞,本研究结果为PDCoV侵入机制提供了新的参考依据。