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枸橼酸喷托维林口腔崩解片,是由重庆巨琪诺美制药有限公司研制的改剂型新药,属化学药品第5类。其临床研究已获SFDA批准,临床批件号为2005L00212。口腔崩解片(ODT)是一种新型口服剂型,是近年来片剂研发的热点。该剂型较传统剂型具有服用方便、起效快、生物利用度高、口感好、适合老幼及行动不便者服用等优点。因此,对已上市的疗效肯定的药物进行剂型改造,制成口腔崩解片对于提高患者的服药依从性,解决患者服药难问题具有重要的意义。目的：建立一种专属性强、灵敏度高、结果准确、适用于大批量生物样品定量检测的分析方法,测定人血浆中枸橼酸喷托维林的浓度,用于重庆巨琪诺美制药有限公司研制的枸橼酸喷托维林口腔崩解片人体生物等效性研究,以评价其是否与剂量相同的市售参比制剂,天津力生制药股份有限公司生产的枸橼酸喷托维林糖衣片具有生物等效性,为临床用药提供依据。方法：采用开放、完全随机、双周期(两期试验之间的清洗期为7天)、双制剂等剂量(25mg)交叉口服给药、自身对照单中心临床试验设计。将入选的20名男性健康志愿者按入选先后从小到大依次排序编号为1-20号,然后每位受试者用计算机产生一个随机数字,按随机数字大小分成A、B两组,每组10人,其中一组受试者先服用受试制剂,后服用等剂量的参比制剂；另一组受试者先服用参比制剂,后服用等剂量的受试制剂。在给药前及给药后不同时间点,抽取肘静脉血4m1注入肝素试管中,于3000r/min离心15min分离血浆,置-20℃条件保存,待测。采用以盐酸洛拉曲克作为内标的HPLC-MS/ESI+法测定不同时间点枸橼酸喷托维林的血药浓度。色谱柱：Thermo Hypersil-HyPURITY C18 (150×2.1 mm, 5μm);柱温：25℃；流动相：0.1M乙酸铵溶液(甲酸调pH4.4)-甲醇(35：65)；流速：0.20mL/min;质谱电离模式：电喷雾阳离子电离模式(ESI+)；毛细管电压：3.0KV；锥孔电压：30V；离子源温度：108℃；脱溶剂温度：350℃；锥孔反吹气流量：50L／h；脱溶剂气流量：350L／h；选择离子监测(SIR)定量分析准分子离子峰[M+H]+：m／z334.1(喷托维林),m／z 284.8(洛拉曲克)。数据处理：枸橼酸喷托维林血药浓度采用标准曲线法由Masslynx 4.0质谱工作站计算,并同法对随行的质控样品浓度进行计算,以考核测量数据的可靠性。药代动力学参数的计算和统计学分析使用DAS2.1.1软件完成。拟和血药浓度-时间曲线,计算受试制剂(T)和参比制剂(R)的主要药代动力学参数F、/Tmax、Cmax、AUC0→15和AUC0→∞,对药代动力学参数Tmax、Cmax、AUC0→15和AUC0→∞经自然对数转换后以多因素方差分析(ANOVA)进行显著性检验,然后用双单侧t检验统计处理,计算AUC及Cmax的90%置信区间,评价两制剂的生物等效性。等效标准为AUC和Cmax经自然对数转换后进行方差分析与双单侧t检验,若受试制剂与参比制剂AUC0→15和AUC0→∞对数转化形式之比值的90%置信区间落在80%-125%范围内,Cmax的对数转化形式之比值的90%置信区间落在70%-143%范围内,则认为受试制剂与参比制剂生物学等效。Tmax用非参数法(配对Wilcoxon法)进行统计处理,比较两种制剂达峰时间的差异。结果：在确定的色谱质谱条件下,枸橼酸喷托维林血浆药物浓度定量的线性范围为0.78～300 ng·mL-1,定量下限为0.78 ng·mL-1。以喷托维林峰面积与内标峰面积之比(Y)对浓度(X)进行回归计算,回归方程为：Y=0.0421X-0.01744,r=0.998。喷托维林相对回收率在85%-115%范围内,日内、日间RSD均<15%。提取回收率结果表明,枸橼酸喷托维林空白血浆标准样品低、中、高浓度平均提取回收率均在70%-80%之间,内标平均提取回收率约为81%。稳定性考察结果表明,枸橼酸喷托维林血浆样品在室温放置12h,-20℃反复冻融4次,以及-20℃放置23天,结果稳定,RSD均小于15%。受试者口服受试制剂和参比制剂25 mg后,参比制剂与受试制剂的主要药代动力学参数Tmax、Cmax、AUC0→15和AUC0→∞(均数±标准差)分别为：2.525±1.208h和1.625±0.754 h;59.720133.246 ng/mL和62.282133.059 ng/mL; 228.7701129.242 ng·h/mL和234.4421130.011 ng·h/mL; 244.108±140.729 ng·h/mL和246.7971136.186 ng-h/mL.受试制剂与参比制剂的相对生物利用度F(以AUC0→15为评价依据)为(112.7±45.7)%。方差分析：受试制剂与参比制剂主要药代动力学参数Cmax、AUC0→15和AUC0→∞经自然对数转换后采用方差分析,结果在个体顺序间、制剂间和周期间,两制剂lnCmax、lnAUC0→15、lnAUC0→∞差异无统计学意义(P>0.05),两周期不存在残留效应。双单侧t检验：两制剂lnCmax、lnAUC0→15、lnAUC0→∞经双单侧t检验,结果受试制剂没有超过规定的参比制剂的高限和低限(P<0.05)。两制剂lnAUC0→15、lnAUC0→∞比值的90%置信区间分别为86.0%-123.3%和86.5%-121.2%,均落在80%-125%范围内；InCmax比值的90%置信区间为81.4%-138.4%,落在70%-143%等效区间内。配对Wilcoxon法检验：两制剂Tmax采用配对Wilcoxon法检验,结果两者Tmax差异有统计学意义(P<0.05),受试制剂的达峰时间显著快于参比制剂。结论：用HPLC-MS/ESI法测定人血浆中枸橼酸喷托维林的浓度,方法专属性强、灵敏度高、结果准确,可用于枸橼酸喷托维林口腔崩解片人体生物等效性研究。重庆巨琪诺美制药有限公司研制的枸橼酸喷托维林口腔崩解片(临床试验批件号：2005L00212)与剂量相同的市售参比制剂,天津力生制药股份有限公司生产的枸橼酸喷托维林片(批号0711017)比较,两制剂生物学等效。