鞘氨醇激酶-2在神经细胞中参与自噬激活的机制研究

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目的:研究鞘氨醇激酶-2(SPK2)对神经细胞缺血损伤及自噬活性的影响,并探索SPK2激活自噬的作用机制是否依赖于其BH3功能域,进而与Bcl-2相互作用。方法:利用SPK2的过表达慢病毒(LV-HA-SPK2)以及突变体慢病毒(LV-HA-SPK2-L219A)建立海马神经元(HT-22)细胞稳转株。Western blot法检测SPK2的蛋白表达水平以及标签蛋白HA的表达,检测SPK2酶活性。检测自噬相关蛋白LC3的水平,应用溶酶体抑制剂氯化铵(NH_4Cl)检测自噬流,透射电镜观察细胞自噬体。
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