【摘 要】
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低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)是一种表达丰富的膜糖蛋白,存在于多种组织,尤其是在肝细胞中表达丰富。LDLR与脂代谢关系密切,血浆中胆固醇主要是
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低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)是一种表达丰富的膜糖蛋白,存在于多种组织,尤其是在肝细胞中表达丰富。LDLR与脂代谢关系密切,血浆中胆固醇主要是由肝细胞表面的LDLR清除。LDLR还与多种心脑血管疾病例如冠心病、动脉粥样硬化等疾病关系密切,因此建立靶向LDLR的筛选模型,对寻找或发现治疗高胆固醇血症、冠心病等疾病的新药具有重要意义。传统中药蕴涵珍贵资源,为了从传统中药中筛选降脂药物,本研究克隆了LDLR启动子,并将此启动子与荧光素酶报告基因相连接,构建了低密度脂蛋白受体/荧光素酶(LDLR/Luc)报告基因。将LDLR/Luc报告基因质粒转染至HepG2细胞(称转染细胞),并优化了各种反应条件,包括细胞接种密度、细胞培养时间以及检测底物浓度等条件,在最佳的实验条件下,系统显示了较高荧光素酶活性;实验进一步选择常用降胆固醇药物普伐他汀作为阳性对照药物,发现普伐他汀不同浓度及不同孵育时间可明显提高LDLR/Luc转录活性,呈一定的时间和浓度依赖性。以上结果表明成功地建立了靶向LDLR转录活性的报告基因药物筛选体系。应用该体系对500余种中药提取物进行了筛选,决明子、穿龙薯蓣等提取物显示阳性,与已报道采用动物模型获得的体内降脂实验研究结果一致;决明子为成熟豆科植物决明子的干燥成熟的种子,性寒,味甘苦,祖国医学认为具有清肝明目、利水、通便之功效。药理实验及临床实验均证实决明子能够降低血浆胆固醇。但对于决明子降脂作用的具体机制
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