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目的：肺癌目前仍是全球范围内引起癌症死亡的主要原因,晚期肺癌治疗以化疗为主,但其疗效已达到平台,随着肺癌分子生物学的发展以及相关检测手段的完善,分子靶向治疗NSCLC已经成为近年来的热点。其中EGFR突变通路研究最为深入,多个东西方大型临床试验表明(EGFR-Tyrosine Kinase Inhibitor)EGFR-TKI对EGFR活化突变的肺癌患者疗效良好。在肺癌发生过程中,除基因突变之外,基因易位重排或基因融合同样起着重要的作用。继ALK、ROS融合基因之后,KIF5B-RET融合基因为最新发现的肺癌融合基因,相关基础研究已经证实KIF5B-RET融合基因具有促进细胞增殖和转染成瘤的能力。但目前无论KIF5B-RET融合基因的功能性研究还是药物敏感性研究仅限于小鼠细胞系,该融合基因在人类细胞中的致癌特性尚未得知。BEAS-2B细胞为正常人支气管上皮细胞,是模拟肺癌体外模型较为理想的细胞系,可排除肺癌细胞其他原癌基因靶点激活的干扰,且目前未发现用该细胞来研究KIF5B-RET融合基因的报道。本研究主要应用慢病毒感染的手段构建KIF5B-RET融合基因阳性的稳定转染BEAS-2B细胞株并初步探讨KIF5B-RET融合基因对BEAS-2B细胞的抑制细胞凋亡的作用,为后续的KIF5B-RET功能研究和药物敏感性研究提供载体平台。方法：以KIF5B-RET融合基因融合点附近的BamHI位点为界,利用分段PCR的方法先分别扩增出KIF5B基因片段和RET基因片段,进行电泳鉴定。各片段分别与pEASY-Blunt Zero Cloning载体进行连接后转化感受态细菌DH5a,扩菌后提取质粒进行酶切鉴定和直接测序鉴定。带NheⅠBamHI位点的KIF5B质粒片段和带BamHI、SalⅠ位点的RET质粒片段一起与pCDH-CMV-MCS慢病毒表达载体进行连接后转化感受态细菌DH5a,扩菌后提取质粒进行酶切鉴定和直接测序鉴定。用pMDLg/pRRE、pRSV-REV、 pMD2.G、KIF5B-RET-pCDH四质粒系统共转染293T细胞进行KIF5B-RET慢病毒的包装和生产,收集上清病毒液,感染处于对数生长期的BEAS-2B细胞,感染72小时后提取细胞RNA和蛋白进行RT-PCR和Western blot分别检测KIF5B-RET融合基因mRNA和蛋白表达水平。PI单染色法流式细胞术检测转染后BEAS-2B细胞凋亡。结果：RET基因有variant2和variant4两种形式,本研究分段PCR扩增得到KIF5B片段、RET variant2片段和variant4片段,电泳条带位置与理论大小相符。pEasy-KIF5B、pEasy-RET V2、pEasy-RET V4质粒酶切条带位置与理论大小相符,测序鉴定结果和标准序列基本完全吻合。KIF5B-RET V2-pCDH、KIF5B-RETV4-pCDH慢病毒穿梭质粒酶切条带位置与理论大小相符,测序鉴定结果和标准序列基本完全吻合。pCDH-CMV-MCS-EGFP重组慢病毒载体转染293T细胞及BEAS-2B细胞48小时荧光蛋白表达强,荧光亮度90%以上。RT-PCR检测结果显示KIF5B-RET-PCDH慢病毒转染BEAS-2B细胞后KIF5B-RET融合基因mRNA表达明显,Western blot检测结果显示KIF5B-RET v2-PCDH’慢病毒转染BEAS-2B细胞后KIF5B-RET融合蛋白表达明显。经去血清处理12小时后,KIF5B-RET V2转染BEAS-2B细胞发生凋亡的比例为5.49%、5.98%、5.6%,EGFP转染BEAS-2B细胞发生凋亡的比例为14.56%、15.28%、15.17%,两者差异具有统计学意义(p<0.05)。结论：1、成功构建了KIF5B-RET-PCDH慢病毒表达载体2、成功构建了KIF5B-RET融合基因阳性的BEAS-2B稳定细胞株3、KIF5B-RET融合基因对BEAS-2B细胞有抑制细胞凋亡的作用。