【摘 要】
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目的:通过对把天门药材来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱鉴定,水分、灰分检查,浸出物测定,总黄酮含量测定等方面进行研究,采用液质联用技术分析其具体的化学成分,建立其高效液相指纹图谱,并测定药材中的染料木苷含量,初步建立把天门的质量评价方法,为其质量标准的制订、质量控制及进一步开发利用提供实验依据。方法:采用来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定及薄层色谱鉴定等方法对瑶药材把天门进行生药学定性研究;按《中
【基金项目】
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《广西壮族自治区瑶药材质量标准(第二卷)》质量评价与标准研究项目(MZY2017001); 广西壮瑶药重点实验室(桂科基字[2014]32号); 壮瑶药协同创新中心(桂教科研[2013]20号); 广西重点学科壮药学(桂教科研[2013]16号); 中药学广西一流
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目的:通过对把天门药材来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱鉴定,水分、灰分检查,浸出物测定,总黄酮含量测定等方面进行研究,采用液质联用技术分析其具体的化学成分,建立其高效液相指纹图谱,并测定药材中的染料木苷含量,初步建立把天门的质量评价方法,为其质量标准的制订、质量控制及进一步开发利用提供实验依据。方法:采用来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定及薄层色谱鉴定等方法对瑶药材把天门进行生药学定性研究;按《中华人民共和国药典》2015年版四部通则中规定的相关方法对把天门进行水分检查、灰分检查和浸出物含量测定;采用系统预试验法(试管法或滤纸法)对把天门药材的水提取物、乙醇提取物和石油醚提取物的化学成分进行研究;通过单因素考察以及正交试验优选出把天门总黄酮的最佳提取工艺,并采用紫外-可见分光光度法(UV-Vis)测定其总黄酮含量;采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)技术对把天门甲醇提取物的化学成分进行初步分析,结合文献报道推测其结构;采用高效液相色谱法(HPLC)对其乙酸乙酯萃取部位指纹图谱进行研究;采用高效液相色谱法(HPLC)测定把天门药材中染料木苷含量。结果:(1)把天门原植物为直立灌木,枝有棱,被疏柔毛;羽状三出复叶,顶端微凹,有小突尖头;花萼钟状,5深裂;花冠红紫色,翼瓣短于旗瓣和龙骨瓣。把天门药材外表灰棕色,粗糙,栓皮较疏松,易脱落;质韧,具强纤维性。显微鉴定方面,根横切面可见木栓层、纤维、棕色块、皮层、韧皮部、形成层、导管及射线;粉末可见淀粉粒、草酸钙方晶、晶鞘纤维、木栓细胞、导管等。薄层鉴定结果显示,把天门样品在与染料木苷对照品斑点对应的位置上均有黄色荧光斑点。(2)把天门水分含量在6.32%~10.74%之间,总灰分含量在1.88%~4.99%之间,酸不溶性灰分含量在0.18%~1.65%之间,醇溶性热浸出物含量在18.04%~31.33%之间。(3)把天门药材含有黄酮、糖、多糖、苷类、有机酸、酚类、鞣质及蒽醌等成分类型。把天门中总黄酮的最佳提取工艺为:精密称取药材粉末0.5g,加入70%乙醇20 ml,提取60 min;芦丁对照品在0.004 mg/ml~0.040 mg/ml范围内呈良好线性关系(r ~2=0.9996),回归方程:Y=35.1422X+0.0406453,平均回收率为95.29%(RSD为0.65%,n=6),10批药材总黄酮含量范围为31.84 mg/g~75.85 mg/g。(4)推测出9个化合物,分别为bufotenine、catechin、O-methylbufotenine、genistin(染料木苷)、dalbergioidin、genistein(染料木素)、formononetin(芒柄花素)、cyclokievitone及2,2-dimethyl-5-phenethylchromane-3,7-diol。(5)建立了把天门药材的HPLC指纹图谱,共标定20个共有峰,指认出4、7号共有峰分别为染料木苷、染料木素;10批样品的相似度均大于0.9。聚类分析表明,10批把天门药材可聚为二大类。主成分分析结果显示,前4个主成分因子的累计方差贡献率为87.673%;主成分得分图显示,10批把天门药材可分为二类。(6)把天门药材中染料木苷的最佳提取工艺为:精密称取药材粉末0.5g,以甲醇为提取溶剂,料液比1:30,提取时间为60 min;染料木苷浓度在0.00239mg/ml~0.07650 mg/ml范围内呈良好线性关系(r=0.9994),回归方程:A=70087.04 C+49.3019,平均加样回收率为95.77%(RSD为0.34%,n=6);10批把天门中染料木苷的含量在0.0929 mg/g~0.3983mg/g之间。结论:上述方法操作简便、特征性强、重复性好、结果稳定,可作为瑶药材把天门的质量评价方法,为其质量控制、质量标准的制订,以及临床用药的安全、准确提供实验依据。
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