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目的:通过体内外实验研究清解扶正颗粒(Qingjie Fuzheng Granules;QFG)对大肠癌细胞生长的抑制作用及其作用机制,进一步为其临床应用提供实验依据。方法:体外实验:(1)不同浓度QFG(0、0.5、1、2 mg/mL)干预大肠癌HCT-116、HCT-8细胞,采用MTT、LDH检测细胞活力及细胞毒作用;集落形成、细胞周期分布检测细胞增殖;Hoechst33258、AnnexinV-PI染色观察细胞凋亡;Western Blot检测增殖凋亡、血管新生等相关蛋白(Survivin、Cyclin D1、CDK4、p21、cleaved-caspase-3/-8/-9、Bax、Bcl-2、Fas、FasL、VEGF-A)的表达。(2)分别加入caspase-3/-8/-9的抑制剂,用2mg/mL QFG干预HCT-116、HCT-8细胞,观察细胞活力及细胞凋亡。(3)不同浓度QFG(0、0.5、1、2 mg/mL)干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC),MTT检测HUVEC活力;Transwell、Tube Formation检测HUVEC的迁移及血管网形成能力;进一步加入外源性VEGF-A刺激后,用MTT、Transwell及Tube Formation实验观察QFG对VEGF-A介导的血管新生的影响。(4)不同浓度QFG干预大肠癌HCT-116、HCT-8细胞,Western Blot检测QFG对大肠癌细胞PI3K/AKT和ERK信号通路相关蛋白表达的影响。体内实验:构建HCT-116皮下移植瘤裸鼠模型,按照裸鼠瘤体体积大小随机分为对照组(Control组)和QFG组(n=10),QFG组按1 g/kg灌胃给药,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每周给药6天,隔天测量裸鼠瘤体大小和体重,一个月后处死裸鼠,剥离瘤体称重拍照,然后将瘤体组织分成2份,其中1份保存于液氮中、1份进行固定包埋;采用TUNEL染色检测瘤体组织的细胞凋亡;IHC检测瘤体组织中增殖、凋亡、血管新生等相关蛋白(Ki-67、Survivin、Cyclin D1、CDK4、p21、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、CD31、VEGF-A、VEGFR-2)的表达;Western Blot检测瘤体组织中PI3K/AKT和ERK信号通路相关蛋白表达的影响。结果:体外实验:(1)MTT和LDH实验结果显示QFG能显著抑制大肠癌细胞的活力并增加其细胞毒作用(P<0.05);集落形成及细胞周期实验结果显示QFG能抑制大肠癌细胞的增殖(P<0.05);Hoechst33258及AnnexinV-PI染色实验结果显示QFG能诱导大肠癌细胞的凋亡(P<0.05);Western Blot实验结果显示QFG能下调大肠癌细胞中Survivin、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、VEGF-A的表达,而上调p21、cleaved-caspase-3/-8/-9、Bax、Fas、FasL的表达(P<0.05)。(2)加入抑制剂后,MTT及Hoechst33258染色实验结果显示caspase-3/-8/-9抑制剂均能够抑制QFG对大肠癌细胞活力的抑制作用及凋亡的促进作用(P<0.05)。(3)MTT实验结果显示QFG能明显抑制HUVEC细胞的活力(P<0.05);Transwell及Tube Formation实验结果显示QFG能抑制HUVEC细胞的迁移及血管网形成能力(P<0.05)。(4)Western Blot实验结果显示QFG能够下调大肠癌细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT以及p-ERK/ERK的比值(P<0.05)。体内实验:裸鼠体重及瘤体的数据结果显示QFG对移植瘤裸鼠体重无影响(P<0.05)而能明显抑制瘤体的生长(P<0.05)。TUNEL染色实验结果显示,QFG组瘤体组织中发生大量凋亡(P<0.05)。IHC实验结果显示,QFG组中瘤体组织中Ki-67、Survivin、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、CD31、VEGF-A的表达明显下降(P<0.05),p21、Bax、cleaved-caspase-3的表达显著升高(P<0.05)。Western Blot实验结果显示QFG组中瘤体组织中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT以及p-ERK/ERK的表达水平的比值明显下降(P<0.05)。结论:QFG在体内外对大肠癌均具有显著的抑制作用,能够抑制大肠癌细胞增殖,诱导大肠癌细胞凋亡,抑制大肠癌血管新生。QFG能够通过抑制PI3K/AKT和ERK信号通路的活化发挥对大肠癌的抑制作用。