PKC-ERK1/2通路在臭氧预处理减轻大鼠肝I/R损伤的作用研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:kevinlynx
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目的:探讨热休克蛋白70参与蛋白激酶C介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠臭氧预处理的肝缺血再灌注过程中的作用。方法:60只大鼠随机分成6组(n=10):S组(假手术对照组:开腹后分离肝周韧带,不夹闭,45分钟后关腹,再3小时后取标本);IR组(缺血再灌注组:夹闭支配肝脏左中叶的肝蒂);03组(臭氧预处理组:以臭氧浓度为50 mg/l的气体连续腹腔内注射五天);O3+PD98059组(ERK1/2抑制剂组PD98059:连续5天的臭氧氧化预处理,开腹前按照5mg/kg的剂量静脉给PD98059溶液);O3+CHE组(蛋白激酶C抑制剂白屈菜季铵碱CHE组:连续5天的臭氧氧化预处理,开腹前按照5mg/kg的剂量静脉给CHE溶液;IR+PMA组(蛋白激酶C激活剂豆蔻酸佛波酰乙酯PMA:缺血再灌注前按照4ug/kg的剂量静脉给PMA溶液)。检测项目:(1)血清中ALT、AST水平:缺血45分钟,再灌注3小时后检测腹主动脉血中ALT和AST水平;(2)肝组织病理学;(3)热休克蛋白70、蛋白激酶C和ERK1/2:免疫印迹法定量检测左肝叶组织细胞中热休克蛋白70、蛋白激酶C和ERK1/2。结果:(1)血清中ALT、AST:IR组较其他各组明显升高(P均<0.05),说明缺血再灌注可引起肝功能受损;O3组较O3+PD98059组、O3+CHE组和IR+PMA组明显降低(P均<0.05),说明臭氧氧化预处理可减轻肝功能的损伤;O3+PD98059组较O3+CHE组明显降低(P<0.05),说明抑制蛋白激酶C信号通路较抑制ERK1/2信号通路更能造成肝功能损伤。(2)热休克蛋白70蛋白表达情况:与S组比较,IR组热休克蛋白70表达水平明显升高(P<0.01),说明缺血再灌注损伤可引起热休克蛋白70表达增加;臭氧氧化预处理的O3组、O3+PD98059组、O3+CHE组和IR+PMA组较S组和IR组明显升高且O3组表达水平最高(P<0.05),说明臭氧氧化预处理可以诱导热休克蛋白70表达水平升高,单纯激活蛋白激酶C亦可使热休克蛋白70表达水平升高。(3)蛋白激酶C活性:臭氧预处理的O3组、O3+PD98059组、O3+CHE组和IR+PMA组较S组和IR组明显升高且O3组表达水平最高(P<0.01),说明臭氧氧化预处理可激活蛋白激酶C。(4)ERK1/2活性:O3+PD98059组、O3+CHE组、O3组和IR+PMA组较S组和IR组明显升高且O3组表达水平最高(P<0.001),说明臭氧氧化预处理可激活ERK1/2信号通路。(5)肝组织超微结构变化:S组肝小叶结构正常,O3组、O3+PD98059组、O3+CHE组肝小叶形态基本正常,仅见少许充血和少量炎症相关细胞;IR组、IR+PMA组可见结构紊乱的肝小叶,肝索间可见明显的充血及弥漫较多的炎症细胞,肝细胞形态也发生改变,部分肿胀呈气球样变,同时可见明显的点片状坏死灶。结论:臭氧预处理通过激活蛋白激酶C信号通路和ERK1/2信号通路使热休克蛋白70的表达水平显著增加,从而使大鼠肝脏缺血再灌注损伤明显减轻。
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