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目的用噬菌体随机12肽库对乳腺癌患者血清进行差异性筛选,以获得乳腺癌特异性的新的肿瘤标志物。方法1.分别将正常人血清和乳腺癌患者血清用微孔板包被,在37℃条件下,对噬菌体随机12肽库运用减性筛选的方法进行筛选,先将噬菌体肽库与正常人血清进行预吸附,然后将未结合的噬菌体再与乳腺癌患者血清进行吸附。以此重复筛选三次,获得重组噬菌体。2.挑取单个肉眼显色较好的噬菌斑进一步扩增,与筛选时的血清结合,鉴定(ELISA方法)其与乳腺癌血清的亲和力情况,选择稳定性和差异性较明显的噬菌体,再次扩大血清样本含量进行鉴定,最终得到特异性较高的单克隆噬菌体。3.将该单克隆噬菌体送DNA测序,并根据短肽的插入位点和氨基酸遗传密码表获得相应插入的短肽序列,并进行同源性分析。结果1.经过三轮筛选,噬菌体得率提高约1000倍。2.挑单个显色较好的噬菌体,经过反复鉴定后,得到两个特异性较好的噬菌体,经DNA测序发现其携带有相同DNA序列的特异短肽,均为QVSAEHKVQGFW.3.该特异的短肽序列与乳腺癌CA153(+)、CA153(-)血清相结合无显著差异性；与乳腺癌血清的结合率高于与宫颈癌、卵巢癌、鼻咽癌、肝癌、结肠癌、非霍奇金淋巴瘤患者血清结合率。4.将特异性短肽(QVSAEHKVQGFW)输入美国国立生物技术信息中心(NCBI)网站上的GenBank DNA序列数据库中,和目前的己知基因和蛋白比对,发现并无同源性,且国内外文献均未见报道,因此可能是我们筛选到的一种新的乳腺癌相关抗原的配体。结论本研究利用噬菌体随机12肽库展示,成功筛选到能与乳腺癌相关抗原具有较高亲和力的短肽(QVSAEHKVQGFW),有可能成为诊断乳腺癌的有用血清肿瘤标志物。也为乳腺的癌早期诊断、联合检测和靶向治疗的进一步研究了候选靶标,具有一定的指导意义。