生物活性肽(Bioactive peptides, BPs)是蛋白质中25个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称,是源于蛋白质的多功能化合物。乳中的蛋白质是生物活性肽的重要来源,乳源性生物活性肽(Milk-Derived? Bioactive peptides? )主要指由动物乳中酪蛋白与乳清蛋白酶促水解制得的比原蛋白更易溶解于水和被人体消化吸收的介于蛋白质与氨基酸之间的具有生物活性的小分子肽段,其耐酸、耐热、渗透压低,是活性肽中需求量最大、应用最广的保健食品素材。目前科学家已从不同的乳蛋白酶解产物中分离出了几十种活性肽,科研人员用生物发酵法、化学合成法以及基因工程法制备这些乳源性生物活性小肽。在小肽的研究课题中,其制备方法和活性保护技术已经成为国际研究热点。本实验利用表达载体pTYB11,构建了四个乳源性生物活性肽基因的原核表达载体,并成功构建了其E.coli BL21表达重组目的白系统。本研究主要分为以下内容:乳源性生物活性肽的原核表达和Intein介导的蛋白质自剪切纯化。实验挑选四个已经科学报道的乳源性免疫活性肽,根据E.coli偏爱密码子表设计目的基因序列和引物,通过PCR方法扩增出目的基因,构建重组表达质粒和重组表达菌株,经IPTG诱导E.coli BL21表达后,利用Intein介导的蛋白质自剪切原理用Chitin亲和柱纯化重组蛋白,并通过亲和Tag的抗体进行Western-Blotting对表达产物的分析,验证表达蛋白的特异性。结果表明目的蛋白具有较高的纯度和特异性,从而为进一步研究其生物活性提供了候选蛋白。