【摘 要】
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塔里木兔(Lepus yarkandensis)是典型的沙漠动物,具有良好的干旱适应性。肾脏主要通过血管加压素调节的水重吸收通路和近端小管碳酸氢盐重吸收通路维持机体的水平衡和酸碱平衡。本研究通过对比塔里木兔与家兔肾脏之间的差异表达基因(Differentially expressed gene,DEGs)与差异表达转录因子,探究肾脏中转录因子和DEGs与塔里木兔干旱荒漠环境适应性之间的关系。方法:
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“ 塔里木兔水通道蛋白适应性进化研究”(项目编号:31460563); 国家自然科学基金项目“塔里木兔细胞色素 P450 的耐干旱功能研究”的部分研究成果(项目编号:32160112)课题主持人:张建萍 教授(塔里木大学);
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塔里木兔(Lepus yarkandensis)是典型的沙漠动物,具有良好的干旱适应性。肾脏主要通过血管加压素调节的水重吸收通路和近端小管碳酸氢盐重吸收通路维持机体的水平衡和酸碱平衡。本研究通过对比塔里木兔与家兔肾脏之间的差异表达基因(Differentially expressed gene,DEGs)与差异表达转录因子,探究肾脏中转录因子和DEGs与塔里木兔干旱荒漠环境适应性之间的关系。方法:通过转录组测序数据预测差异表达的水重吸收基因及其转录因子,对肾脏水重吸收相关的三个转录因子HIF1A、NFATc1和NF-κB1进行生物信息学的序列分析并构建系统进化树,再利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、免疫组化和Western blotting在m RNA和蛋白质水平上检测和验证DEGs与转录因子在肾脏中的表达。结果:塔里木兔与家兔肾脏的转录组学数据分析显示,在这两个物种共有的表达基因中,有6610个基因显著上调表达,5727个基因显著下调表达。根据数据预测出232个转录因子及其对应的靶基因,从中筛选出与肾脏水重吸收相关的基因和转录因子。q RT-PCR结果显示,AQP1、AQP2、ADCY3、HIF1A、CREB3和NFATc1在塔里木兔肾脏中表达水平较高;FXYD2 m RNA表达水平较低。在Western blotting中,转录因子HIF1A、NFATc1、NF-κB1和关键蛋白ADCY3、ATP1A1和SLC4A4在塔里木兔肾脏中高度表达。免疫组化结果显示,ADCY3蛋白主要定位于肾脏集合管基底外侧膜中,ATP1A1蛋白主要定位于肾脏近端小管基底外侧膜和髓质的细段,SLC4A4蛋白主要定位于肾脏近端小管的基底外侧膜。结论:转录因子HIF1A、NFATc1和NF-κB1对塔里木兔肾脏水分重吸收相关基因的表达,具有重要的调控作用,增加塔里木兔肾脏中重要水通道蛋白的表达,提高塔里木兔体内水分的利用效率,减少对外界水分的需求,使塔里木兔更好地适应干旱沙漠环境。
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