白介素-9促进胰腺癌细胞的增殖和迁移的作用及机制研究

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目的研究IL-9促进胰腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的作用及机制,探讨胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中JAK/STAT3通路的变化,进一步明确IL-9是否通过激活JAK/STAT3通路来发挥促胰腺癌细胞生长作用。方法以人胰腺癌细胞株PANC-1为研究对象。体外培养PANC-1细胞,分别使用0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL浓度的IL-9干预PANC-1 24h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,实时定量PCR检测细胞上IL-9R的mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞的凋亡,TranswellTM实验检测细胞的侵袭和迁移能力;再分别使用0、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL浓度的IL-9干预PANC-1 1h后,用Western blot法检测细胞中信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。在IL-9的机制研究中,分别使用0、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L浓度的STAT3抑制剂AG490预处理PANC-1 24h后,再用20ng/mL IL-9进行干预,干预1h后采用Western blot法检测细胞中STAT3和p-STAT3蛋白水平,干预24h后CCK-8法检测细胞的增殖,对比未使用抑制剂前细胞的增殖、STAT3和p-STAT3蛋白表达变化情况。结果不同浓度IL-9干预相同时间后,PANC-1的IL-9R mRNA表达水平及细胞增殖率随着IL-9浓度的升高呈上升趋势,到20ng/mL时细胞的IL-9R mRNA表达水平及增殖率显著大于0ng/mL(P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力也呈浓度依赖性升高趋势,且在20ng/mL时差异最显著(P<0.05),细胞的凋亡率随浓度的升高有下降趋势,但各个浓度组间差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,IL-9干预后PANC-1细胞中的p-STAT3蛋白表达水平显著增高(P<0.05),但STAT3蛋白水平无明显改变(P>0.05),提示IL-9促进胰腺癌细胞增殖过程中可能激活STAT3磷酸化。对比未使用抑制剂前细胞的增殖率,使用不同浓度AG490预处理后,IL-9对PANC-1细胞的促增殖作用减弱,在浓度为80μmol/L时最显著(P<0.05),且p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),但STAT3蛋白水平各组间浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-9可能通过激活JAK/STAT3通路激活胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,但对细胞凋亡无明显影响,这一作用具有浓度依赖性,本研究深化认识了JAK/STAT3在胰腺癌发生发展中的作用,为胰腺癌进一步研究提供了实验依据。
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