扬州地区猫消化道寄生虫调查及国产米尔贝肟与吡喹酮复合片剂的临床药效评价

来源 :季正剑 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chao_huang
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寄生虫病是猫最常见的一种疾病,其病原包括蠕虫(吸虫、绦虫、线虫)、原虫和外寄生虫,其中有些种类还可感染人,为人兽共患寄生虫,对人类健康构成潜在威胁。基于此,本论文对扬州地区猫(包括城郊流浪猫、农村未免疫未驱虫猫)的消化道寄生虫感染情况进行了调查,对剖检获得的寄生虫种类进行形态学鉴定,并对其中具有公共卫生学意义的虫种进行分子生物学鉴定及其系统发育分析,最后评估了国内某公司生产的米尔贝肟与吡喹酮复合片剂对猫消化道寄生蠕虫的驱虫效力。研究结果如下:1、扬州地区猫消化道寄生虫感染情况调查采用饱和盐水漂浮法和水洗沉淀法对54只猫的粪便样品进行检查,共检出11种寄生虫虫卵或卵囊,分别是华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)、棘口吸虫(Echinostomatidae)、咽 口吸虫(Pharyngostomum spp.)、后殖吸虫(Metagonimus spp.)、迭宫绦虫(Spirometra spp.)、犬复孔绦虫(Dipylidium caninum)、猫弓首蛔虫(Toxocara cati)、毛细线虫(Capillaria spp.)、钩口线虫(Ancylostoma spp.)、猫等孢球虫(Isospora felis)和芮氏等孢球虫(I.rivolta),其感染率分别为 37.04%、22.22%、35.19%、7.41%、38.89%、3.70%、9.26%、38.89%、1.85%、20.37%和3.70%。优势种为迭宫绦虫和毛细线虫。猫感染寄生虫的总感染率为87.04%(47/54,95%CI:77.8%~96.3%)。混合感染2种及以上寄生虫的感染率为64.81%,其中混合感染3种寄生虫最多(29.63%),其次为混合感染2种寄生虫(20.37%),最多混合感染6种寄生虫(1.85%)。2、猫消化道寄生蠕虫种类的形态学鉴定将剖检获得的猫寄生虫虫体制作染色封片标本,观测虫体的形态与结构特征,对虫体进行种类鉴定。共获得8科9属10种寄生虫,分别是后睾科(Opisthorchiidae)、支睾属(Clonorchis)的华支睾吸虫(C.sinensis)和后睾属(Opisthorchis)的猫后睾吸虫(O.felineus),棘口科(Echinostomatidtae)、棘隙属(Echinochasmus)的日本棘隙吸虫(E.japonicus)和叶形棘隙吸虫(E.perfoliatus),双穴科(Diplostomatidae)、咽口属(Pharyngostomum)的心形咽口吸虫(P.cordatum),异形科(Heterophyidae)、后殖属(Metagonimus)的横川后殖吸虫(M.yokagawai),双叶槽科(Diphyllobothriidae)、迭宫属(Spirometra)的曼氏迭宫绦虫(S.mansoni),囊宫科(Dilepididae)、复孔属(Dipylidium)的犬复孔绦虫(D.caninum),弓首科(Toxocaridae)、弓首属(Toxocara)的猫弓首蛔虫(T.cati),钩口科(Ancylastomatidae)、钩口属(Ancylostoma)的管形钩口线虫(A.tubaeforme)。3、猫消化道寄生蠕虫的分子生物学鉴定及其系统发育分析利用PCR技术分别对5种人兽共患寄生虫(华支睾吸虫、曼氏迭宫绦虫、犬复孔绦虫、猫弓首蛔虫及管形钩口线虫)的 ITS2序列、COX1/COX2/rRNA(16S RNA+tRNA-Cys+12S RNA)序列进行扩增、克隆和测序,序列经BLAST 比对后提交GenBank并获得登录号。应用DNASTAR软件中的MegAlign-Clustal W及MEGA5.0对获得的序列进行分析,并利用NJ法基于各虫种的ITS2、COX1/COX2/rRNA序列构建系统进化树,分析其种系发育关系。测序结果显示:华支睾吸虫、犬复孔绦虫、曼氏迭宫绦虫、猫弓首蛔虫及管形钩 口线虫 ITS2 序列的长度分别是 420 bp、770bp、443 bp~454 bp、460 bp 及 339 bp~340 bp;华支睾吸虫COX2序列长度为913 bp,犬复孔绦虫rRNA序列长度为992 bp~995 bp,曼氏迭宫绦虫COX1序列长度为903 bp~906 bp,猫弓首蛔虫COX1序列长度为339 bp~340 bp,管形钩口线虫COX1序列长度为252 bp。5种消化道寄生虫ITS2序列、COX1/COX2/rRNA序列种内差异较小,种间差异显著。系统进化树显示本研究中的5种消化道寄生虫与GenBank中发布的不同宿主来源和不同地理分布的对应虫种处在同一进化分支上;华支睾吸虫与猫后睾吸虫为姊妹群,猫弓首蛔虫与犬弓首蛔虫为姊妹群,管形钩口线虫与犬钩口线虫为姊妹群;犬复孔绦虫为猫源基因型犬复孔绦虫;曼氏迭宫绦虫属于亚洲谱系的曼氏迭宫绦虫。分子分类鉴定结果与形态学鉴定结果一致。4、米尔贝肟与吡喹酮复合片剂驱除猫消化道寄生虫的药效试验以驱虫率与驱净率或虫卵减少率与转阴率为指标,评价了米尔贝肟与吡喹酮复合片剂对消化道寄生虫的驱虫效力,并与国外同类产品Milbermax(?)和吡喹酮单方相比较。结果显示:受试药物低剂量组、中剂量组、高剂量组对华支睾吸虫的驱虫率与驱净率分别为88.0%~98.2%和18.8%~50.0%,对棘口科吸虫均为100.0%,对咽口吸虫分别为99.7%~100.0%和92.3%~100.0%,对迭宫绦虫分别为67.9%~88.7%和50.0%~70.0%,对犬复孔绦虫分别为 84.1%~100.0%和 33.3%~100.0%,对猫弓首蛔虫分别为 93.9%~1 00.0%和60.0%~100.0%,对钩口线虫分别为70.1%~100.0%和50.0%~100.0%,对毛细线虫的虫卵减少率和转阴率分别为89.2%~100.0%和0%~100.0%。Milbermax(?)组对华支睾吸虫、棘口科吸虫、咽口吸虫、迭宫绦虫、犬复孔绦虫、猫弓首蛔虫和钩口线虫的驱虫率分别为 97.3%、100.0%、99.7%、84.9%、100.0%、100.0%和 100.0%,驱净率分别为 53.3%、100.0%、92.3%、75.0%、100.0%、100.0%和100.0%,对毛细线虫的虫卵减少率和转阴率分别为100.0%和90.0%。吡喹酮单方组对华支睾吸虫、棘口科吸虫、咽口吸虫、迭宫绦虫和犬复孔绦虫的驱虫率分别为93.2%、100.0%、100.0%、83.0%和100.0%,驱净率分别为31.3%、100.0%、100.0%、50.0%和100.0%,对毛细线虫无效。受试药物对猫无不良作用。结论:扬州地区猫感染有吸虫、绦虫、线虫和球虫等多种消化道寄生虫,感染率高,多数为混合感染。经对虫体形态学鉴定,发现扬州地区猫感染8科、9属、10种消化道寄生蠕虫,其中有些虫种具有人兽共患性。华支睾吸虫、曼氏迭宫绦虫、犬复孔绦虫、猫弓首蛔虫及管形钩口线虫的分子鉴定结果与形态学鉴定结果一致,显示mtDNA序列和rDNA序列是消化道寄生虫的可靠遗传标记。国产米尔贝肟与吡喹酮复合片剂按剂量(2mg/kg+5 mg/kg)一次经口投服,对猫自然感染的寄生虫有良好的驱虫效果,与国外同类产品Milbermax(?)的效果相当。
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