海洋微生物由于其复杂多变的生存环境形成了与陆地微生物不同的代谢途径,可产生具有较强生物活性的新颖代谢产物,是天然药用化合物的重要来源。本课题所用菌株均分离于海口市东寨港红树林土壤,现保存于本实验室。对上述菌株进行活性评价,筛选出具有较强抗肿瘤能力的活性菌株,对该菌株的次级代谢产物进行分离纯化,并探讨其抗肿瘤活性及抗肿瘤机理。主要研究内容如下:（1）对来自海口市东寨港红树林的各菌株粗提物进行细胞毒性检测,结果显示菌株HN42粗提物对宫颈癌He La细胞毒性最强。当粗提物浓度为100μg/m L时,He La细胞的存活率为11.92%。因此,对活性较高的菌株HN42进行形态学观察和16Sr DNA分子学鉴定,确定该菌株为变异链霉菌（Streptomyces variabilis）。通过构建裸鼠宫颈癌模型,采用变异链霉菌HN42粗提物给药治疗,结果表明,与对照组相比,注射药物组小鼠体重均无明显差异、肿瘤体积增长速度相对较慢、各组织未见有病理性的改变,上述结果说明其具有良好的抑制肿瘤生长的效果。（2）对海洋变异链霉菌HN42进行发酵处理,并通过一系列萃取实验制备甲醇相粗提物,利用Sephadex LH-20柱层析、中压液相柱层析、硅胶柱层析等方法进行分离纯化,得到一种抗肿瘤活性化合物。采用波谱分析确定该化合物的结构,质谱结果显示[M+H]+266.0,结合核磁数据解析,确定该化合物为茴香霉素（Anisomycin）。（3）检测Anisomycin在抗宫颈癌中细胞生物学行为的影响,包括细胞增殖、凋亡和迁移。利用MTT法检测Anisomycin对He La细胞的IC50为1.19μg/m L,即Anisomycin显著抑制细胞的增长。细胞周期实验显示,当Anisomycin浓度为3.38μg/m L时,G0/G1期细胞比对照组增加10.06%,说明Anisomycin在G0/G1期对细胞造成干扰。细胞凋亡实验显示,当Anisomycin浓度为3.38μg/m L时,细胞早期凋亡率比对照组增加53.25%,说明Anisomycin可使He La细胞发生早期凋亡。划痕愈合实验显示,24 h后Anisomycin组划痕几乎未变化,即Anisomycin降低了He La细胞的迁移能力。上述结果说明,Anisomycin刺激He La细胞后,细胞的生长、细胞迁移均受到抑制,并促使细胞发生凋亡。（4）深入探讨Anisomycin抗宫颈癌的分子机制。首先通过激光共聚焦显微镜、流式细胞术、Western Blot、ELISA等实验证明了Anisomycin可促使He La细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白、细胞因子IL-1β、核转录因子-κB（Nuclear factor-κb,NF-κB）表达量及活性氧（ROS）含量增加,并且使线粒体膜通透性改变,为ROS的生成提供依据。其次,在Anisomycin作用细胞前采用抗氧化剂NAC对细胞进行预处理,发现NF-κB、NLRP3炎症小体及下游细胞因子IL-1β的表达受到抑制,说明NAC可抑制Anisomycin诱导的NF-κB、NLRP3炎症小体及下游细胞因子IL-1β的表达。最后,在Anisomycin作用细胞前采用NF-κB抑制剂BAY11-7082对细胞进行预处理,发现对Anisomycin诱导的ROS含量增加无影响,但对Anisomycin诱导的NLRP3炎症小体及IL-1β的表达具有抑制作用。综上,这可能是Anisomycin通过ROS/NF-κB/NLRP3信号通路发挥抗肿瘤作用,即Anisomycin刺激He La细胞产生过量ROS,激活NF-κB并上调NLRP3炎症小体及下游细胞因子IL-1β的表达,从而达到抗肿瘤效果,为宫颈癌的治疗提供了新的理论依据。