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目的:观察全身炎症反应综合征(SIRS)患者外周血中CD4+CD25+Treg比例(Treg%,CD4+CD25+Treg/CD4+Tc)的变化,并检测CD4/CD8,同时以嗜银染技术观察患者外周血T淋巴细胞核仁形成区银染蛋白(Ag-NORs)数量,以核仁银染面积与核面积的比值(IS%)表示,以了解T淋巴细胞的增殖情况,进而探讨CD4+CD25+Treg与机体细胞免疫之间的关系。
材料与方法:选择2006年8月~2007年8院入住我院综合ICU的SIRS患者50例,均符合1991年8月美国胸科医师学会(ACCP)和危重病医学会(SCCM)联席会议制定的SIRS诊断标准。健康对照组40例,均选自本院健康查体者,年龄、性别构成较病例组均无明显差异。收集患者性别、年龄、原发疾病、感染部位等一般资料,测定肝、肾功能、电解质、动脉血气体温、白细胞计数、中性粒细胞计数、中性粒细胞比例等,计算APACHEII评分。病例中27例为脓毒症患者,23例为严重多发伤患者。24 h内及5天后进行常规感染筛查,包括血常规、痰培养、外周血培养和X线胸片,观测患者的继发感染情况。对所有病例连续动态观察5 d,并随访30 d以上,记录随访期间死亡的病例数。
于诊断成立后的24小时内无菌抗凝抽取静脉血2ml,2小时内应用流式细胞仪技术(FCM)进行外周血CD4+CD25+Treg、CD4/CD8的检测。以CD25抗原荧光强度100的细胞定义为CD25high细胞[1],同时取无菌抗凝血0.3-0.5ml加入T淋巴细胞培养液中,37℃培养72小时,分离细胞并低渗破膜后搜集细胞核制片,硝酸银染色,应用图像分析系统,每例患者随机取10个淋巴细胞核,计算核仁银染面积与核面积的比值(IS%),取其平均值作为检测结果。于诊断成立后第5天,重复抽取静脉血检测CD4+CD25+Treg的变化。
结果:和健康对照组相比,SIRS患者外周血中CD4+CD25+Treg的比例显著升高,并且呈持续升高,第一天和第五天相比,IS%及CD4/CD8显著下降,和健康对照组相比,均有显著差异。行相关分析发现,CD4+CD25+Treg的比例水平和IS%及CD4/CD8呈负相关,对相关系数检验均有统计学意义。进一步分析发现,SIRS死亡者的CD4+CD25+Treg比例水平较存活者升高。对脓毒症及多发伤患者进行比较发现,前者CD4+CD25+Treg比例较高,前者IS%及CD4/CD8均较后者低。根据有无发生继发感染将多发伤患者分为两组,继发感染组和非继发感染组相比较,前者第一天就有CD4+CD25+Treg的升高,较后者更为明显。
结论:
1.SIRS患者外周血中CD4+CD25+Treg的比例显著升高,并且这种升高呈持续性,升高的CD4+CD25+Treg通过多种途径发挥抗炎作用,影响机体免疫平衡状态。
2.CD4+CD25+Treg的比例水平和IS%及CD4/CD8均呈负相关,说明CD4+CD25+Treg比例越高,患者的细胞免疫损害会更严重,CD4+CD25+Treg可通过多种途径直接影响到机体的细胞免疫状态。
3.脓毒症患者的同期CD4+CD25+Treg的水平均较多发伤患者高,并且表现出更为明显的细胞免疫紊乱状态,因其IS%及CD4/CD8均较多发伤组低。
4.多发伤患者中继发感染者和非继发感染者相比较,前者CD4+CD25+Treg升高更为明显。说明CD4+CD25+Treg比例越高,机体免疫紊乱愈严重,从而更容易导致继发感染的发生。
5.将患者根据预后分为死亡组和存活组,发现死亡组患者早期CD4+CD25+Treg比例升高更为显著,说明CD4+CD25+Treg在一定程度可以预测患者的预后。