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目的观察黄精多糖对TLR4信号通路的影响,探讨其干预心肌缺血再灌注损伤机制。方法PartⅠ:SD大鼠随机分组,黄精多糖和阳性药物复方丹参滴丸(30mg·kg-1)连续灌胃给药七天,黄精多糖剂量(按黄精多糖含量及黄精临床用量换算)分别为(225mg·kg-1、450mg·kg-1、900mg·kg-1)。复制大鼠MIRI,假手术组只穿线不结扎,其余各组选用开胸结扎左冠状动脉前降支的技能结扎冠状血流30min,解开结扎线后再灌注120min,建立心肌缺血再灌注模型,观察大鼠心肌缺血先后心电图ST段变化并依据ST段抬高判别心肌缺血程度。检测MIRI后的血流动力学指标,察看并记录大鼠左心室舒张末压、左心室压力上升最大速率、左心室压力下降最大速率的转变;检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α、白介素6的水平;测量大鼠心肌组织TLR4、NF-κB、Bax和Bcl-2的蛋白含量转变情况;同时检测大鼠凋亡情况。PartⅡ:体外孵育大鼠H9c2心肌细胞,利用缺氧复氧技术创建心肌细胞损伤实验,将孵育形态稳定良好的对数期心肌细胞随机分以下组别:(1)正常对照组:H9c2心肌细胞孵育过程当中不采取任何操作;(2)模型组:心肌细胞缺氧21h/复氧6h培养处理;(3)黄精多糖(1.0mg·m L-1)药物组:操作同模型组,在给予缺氧复氧处理前加入黄精多糖终浓度1.0mg·m L-1干预12h;(4)黄精多糖(1.5mg·m L-1)药物组:操作同上,在进行缺氧复氧处理前,加入黄精多糖终浓度为1.5mg·m L-1干预12h。(5)黄精多糖(2.0mg·m L-1)药物组:操作同上,在缺氧复氧处理前,加入黄精多糖终浓度为2.0 mg·m L-1干预12h。倒置显微镜下察看心肌细胞形态学改变;四唑盐比色法检测心肌细胞存活力;酶联免疫吸附法检测H9c2心肌细胞TNF-α、IL-6和Caspase-3的含量;免疫印迹法检测大鼠H9c2心肌细胞相关凋亡蛋白表达。PartⅢ:进一步探讨黄精多糖对心肌缺血再灌注大鼠细胞凋亡的作用与其抑制 TLR4通路的相关性,进一步解释黄精多糖抗MIRI的作用机制。通过建立H9c2心肌细胞损伤模型,将实验分为正常组,模型组,TLR4抑制剂组、黄精多糖(1.5mg·ml-1)和黄精多糖联合TLR4抑制组,检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR基因水平检测TLR4和My D88的含量变化,Western blot蛋白免疫印迹法检测缺氧复氧细胞中Bax、Bcl-2、IκBα和NF-κB的蛋白表达情况。结果1.正常大鼠心电图表现为窦性心律。结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支30min后,二导联心电图ST段抬高,表明心脏冠状动脉结扎成功。解开结扎线后,完成心脏冠状动脉再灌注后,表现为室性心律失常;黄精多糖可以显著改善心肌缺血再灌注大鼠心功能,提高心肌缺血再灌注后的LVEDP水平,减少血清中TNF-α、IL-6的生成量,同时可以减少心肌组织TLR4、NF-κB和Bax的表达,升高Bcl-2的表达,明显降低细胞凋亡率,表明黄精多糖可能通过介导TLR4炎性通路发挥抗缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的功效。2.黄精多糖可以改善缺氧复氧心肌细胞凋亡形态,提高心肌细胞存活率,降低细胞液中TNF-α、IL-6和Caspase-3的含量,明显抑制凋亡蛋白表达,结果提示黄精多糖对缺氧复氧心肌细胞损伤具有保护作用。3.黄精多糖可以有效降低H/R细胞凋亡率,显著降低缺氧复氧心肌细胞TLR4与My D88的基因表达,明显抑制NF-κB的蛋白表达,抑制IκBα的磷酸化,显著增加Bcl-2的含量,抑制促凋亡蛋白Bax的表达。结论黄精多糖对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,TLR4可能是其发挥保护作用的关键靶点之一,其机制可能是通过介导I/R过程中TLR4/NF-κB信号通路,进而抑制TNF-α、IL-6和Caspase-3的释放,发挥抗细胞凋亡的作用。