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仙人掌具有多种药理功能,多糖作为其主要的活性成分,更是具有抗癌、降血糖、抗糖尿病、减轻机体疲劳和增强免疫作用的功效,而且细胞毒性较低,应用于生物体毒副作用小。但由于多糖的结构复杂,其构效关系及作用机理目前还不清楚。本课题以一种海南野生仙人掌(Opuntia monacantha Haw.)为原料,对仙人掌多糖的提取、分离纯化、抗氧化性、纯度鉴定和结构分析等方面进行了研究,结果表明:
1.将响应面分析法应用于仙人掌粗多糖水浸提工艺的研究,采用合理的实验设计对提取工艺进行全面的研究,根据实验结果建立数学模型,通过软件Design-Expert 6.0求解方程,经实际实验修正后,得出最优浸提工艺条件为:水料比5.5:1,浸提温度75℃,浸提时间2.2h;浸提1次,仙人掌多糖的得率为0.81%。
2.对水浸提所得粗多糖OMHP,7次Sevag法脱蛋白,再经透析脱盐后,进行乙醇分级沉淀,当体系中乙醇浓度达45%时沉淀得OMHP-Ⅰ;上清液蒸发浓缩,加入95%乙醇至醇体积分数达65%时,沉淀得OMHP-Ⅱ;上清液蒸发浓缩,加入95%乙醇至醇体积分数达85%时,沉淀得OMHP-Ⅲ。对三个级段沉淀所得多糖进行抗氧化性分析,结果显示:OMHP-Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O<2->·)和自由基DPPH·均有一定的清除作用,且多糖浓度与清除能力成正相关性,OMHP-Ⅲ的清除作用稍强。体外抗肝组织自发性脂质过氧化作用和对醛糖还原酶活性的影响的实验结果也表明,OMHP-Ⅲ要优于OMHP-Ⅰ和Ⅱ。因此选取OMHP-Ⅲ作为进一步纯化的对象。
3.OMHP-Ⅲ利用Sephadex G-100凝胶柱进行纯化分离,得到两个峰,分别为P-1和P-2。收集后通过还原力测定选取抗氧化性较好的P-2。通过高效液相凝胶层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验证明,该组分所带电荷和分子量大小都表现出均一性。
4.利用凝胶渗透色谱法(GPC)测得P-2的重均分子量Mw为20669Da,数均分子量Mn为9658Da,峰位分子量Mp为14820Da,分子量分布宽度(Mw/Mn)为2.14:利用HPLC-ELSD法测定P-2单糖组成及摩尔比为:葡萄糖:鼠李糖:木糖:岩藻糖=1:0.057:1.011:1.003。红外检测分析表明,P-2含有糖的特征吸收峰,而且在891.96cm<-1>和779.33cm<-1>处有吸收,则可初步推测P-2为吡喃环的对称伸缩振动的单糖组成中含有β-吡喃糖。