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铁蛋白是一种由24个亚基组成的铁贮藏蛋白,其贮存的铁具有可溶、无毒和生物可给性等特点,广泛存在于动物、植物、微生物的体细胞中,具有调节生物体内铁的代谢平衡和解除亚铁离子毒性的双重作用。相对于动物铁蛋白,植物铁蛋白的研究较少,主要集中于豆科作物(大豆、豌豆、黄豆、蚕豆、黑豆、红小豆、羽扇豆等)及玉米、紫花苜蓿、南瓜种子、三叶草种子、芸豆叶等。本课题以鹰嘴豆为原料,研究了缓冲液种类、缓冲液pH值、料液比、盐析盐种类、盐浓度等因素对鹰嘴豆铁蛋白提取率及总蛋白提取率的影响。根据Fe2+与邻菲咯琳络合后显示特殊的桔红色的反应原理,在还原剂连二亚硫酸钠存在的条件下,鹰嘴豆提取液中加入0.1%邻菲咯琳溶液后颜色变化确定是否含有铁蛋白,在510nm处测定吸光度值来进行定量分析Braford分光光度法测定蛋白含量。在单因素实验的基础上,利用L9(34)正交实验法及根据Box-Behnken原理采用三因素三水平的响应面分析法优化铁蛋白提取工艺,在料液比1：4,浓度为50mmol/L MgCl2盐析,KH2PO4-NaOH缓冲液pH7.5条件下,鹰嘴豆铁蛋白最优提取率为2.659×10-5。鹰嘴豆经浸泡、匀浆、过滤后粗提液依次用MgCl2和柠檬酸三钠晶体进行盐析,高速离心得到粗提液经MWC03000透析后,用DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换柱层析,大体积pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH缓冲液平衡柱子后,以含0.1-1.0mol/L NaCl的pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH缓冲液梯度洗脱,流速1.0mL/min,5mL/管收集洗脱峰。再用Sephacryl S-500凝胶过滤层析,洗脱液为pH7.5,20mmol/L KH2PO4-NaOH,0.3mol/L NaCl。以0.5mL/min流速洗脱后再以0.1mL/min流速细分离,得到电泳纯度的铁蛋白。Native-PAGE凝胶电泳测得鹰嘴豆铁蛋白的分子量约为560KDa, SDS-PAGE凝胶电泳测得鹰嘴豆铁蛋白含有一种分子量为27.9KDa的亚基。除空白对照组外,饲喂4周龄健康断乳SPF级雌性wistar大鼠低铁饲料4周后,眼底静脉丛采血测定血红蛋白(Hb)含量,选择Hb低于90g/L的大鼠,根据体重和血红蛋白水平随机分为5组。除空白对照组,各组在恢复贫血实验期间继续给予低铁饲料和去离子水。空白对照组、贫血模型对照组每天灌胃给予去离子水,阳性对照组灌胃折合铁离子含量3mg/(kg· d)硫酸亚铁,高剂量组灌胃折合铁离子含量3mg/(kg· d)铁蛋白,中剂量组灌胃折合铁离子含量1.5mg/(kg·d)铁蛋白,低剂量组灌胃折合铁离子含量0.75mg/(kg· d)铁蛋白。处死大鼠后测定其各项血液学指标(血红蛋白、血清铁及红细胞数、红细胞体积、平均红细胞体积、平均血红蛋白含量等血常规)及肝、心、脾、肾重量,结果表明,补充鹰嘴豆铁蛋白可有效提高血清铁浓度,且增加RBC及HCT浓度,改善缺铁性贫血所致器官重量降低,有效改善缺铁性贫血。