川乌Radix Aconiti为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的母根，主要用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝作痛，其镇痛作用良好。主要含乌头碱(aconitine)、新乌头碱(mesaconitine)、次乌头碱(hypaconitine)及其酯键水解后生成单酯的苯甲酰乌头原碱(benzoylaconine)、苯甲酰新乌头原碱(benzoy lmesaconine)、苯甲酰次乌头原碱(benzoy lhypaconine)等，这类成分的分子结构中，因8位羟基的乙酰化和14位的羟基芳酰化，因而呈现强烈的毒性，是川乌中的主要毒性成分。也是镇痛作用的主要有效成分。半夏Pinellia ternata为天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb)Breit.的块茎。功效：燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结；外用消肿止痛。乌头与半夏为“十八反”药对之一，属于中药配伍禁忌的范畴，相反就是两种药物同用能产生剧烈的毒副作用。反药能否同用，历代医家众说纷谈。一些医家认为反药同用会增强毒性、损害机体，因而强调反药不能同用。而古代也有不少反药同用的文献记载，认为反药同用可起到相反相成、反抗夺积的效能。现代临床、实验研究也是同样，共用与否争论不下，无论文献资料、临床观察及实验研究目前均无统一的结论，说明对其研究还要做长期艰苦、深入、细致的工作。本研究旨在探讨不同配伍比例的生半夏对生川乌毒性、药效及生川乌中乌头碱溶出量的影响。第一部分生半夏对生川乌急性毒性的影响目的：以小鼠LD50为指标，观察生半夏对生川乌毒性的影响及与生半夏配伍比例的关系，为临床用药提供实验依据。方法：210只ICR小鼠，雌雄各半，随机取10只作为正常对照组，其余200只随机分为生川乌与生半夏不同配伍比例组(生川乌:生半夏分别为1:0,1:0.25,1:0.5,1:1)，每组50只，每个配伍组再分5个不同剂量组。灌胃(ig)给药一次，空白对照组ig等容积的蒸馏水，观察并记录14d内小鼠毒性反应(咳嗽、呼吸情况、抽搐、跳跃、流涎、稀便等)及死亡情况，计算半数致死量(LD50)。结果：生川乌与生半夏不同配伍比例组的LD50及95％可信限分别为：1:0组为6.214g/kg(4.254-9.078g/kg)，1:0.25组为9.065g/kg(6.849-11.998g/kg)，1:0.5组为9.472g/kg(6.648g-13.497g/kg)，1:1组为11.825g/kg(9.089-15.387g/kg)。各组动物毒性反应的潜伏期、持续时间等无明显差异。结论：生半夏配伍生川乌可明显降低生川乌的毒性，且与生半夏配伍比例有明显的剂量依赖性。第二部分生半夏对生川乌镇痛作用的影响目的：1观察生半夏对生川乌镇痛作用的影响及与生半夏配伍比例的关系，探讨生半夏对生川乌镇痛活性的影响。2比较相同比例的生半夏与生川乌配伍水浸剂与水煎剂镇痛活性的差异，探讨加热煎煮对生川乌镇痛活性的影响。方法：采用热板法(55℃)及醋酸扭体法，以小鼠痛阈和扭体次数为指标，评价煎煮和生半夏对生川乌镇痛作用的影响及与生半夏配伍比例的关系。1.水浸剂的镇痛作用：ICR小鼠50只，随机分为空白对照组及生川乌与生半夏1:0，1:0.25，1:0.5，1:1配伍水浸剂组，各组生川乌剂量均为0.311g/kg(生川乌浓度15.55mg/ml)，ig容积为20ml/kg，空白对照组ig等容积蒸馏水。2.水煎剂的镇痛作用：生川乌与生半夏配伍比例同1。ICR小鼠150只，随机分为生川乌0.311g/kg，1.156g/kg，3.110g/kg剂量组(生川乌浓度分别为15.55mg/ml，77.75mg/ml，155.50mg/ml)，每组50只，各组再随机分为空白对照组和生川乌与生半夏不同配伍比例组，ig容积为20ml/kg，空白对照组ig等容积蒸馏水。结果：在55℃热板试验中，水浸剂生川乌剂量为0.311g/kg，生川乌与生半夏1:0，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠药后痛阈提高值均显著高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，与1:0组相比，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠药后痛阈提高值均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。水煎剂生川乌剂量为0.311g/kg，生川乌与生半夏1:0，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠药后痛阈提高值除1:1组外均显著高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，与1:0组相比，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠药后痛阈提高值均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。水煎剂生川乌剂量分别为1.156g/kg，3.110g/kg时，生川乌与生半夏1:0，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠药后痛阈提高值均显著高于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，与1:0组相比，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠药后痛阈提高值均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。在醋酸扭体试验中，生川乌与生半夏1:0，1:0.25，1:0.5，1:1配伍水浸剂组，小鼠给药15min内的扭体反应次数均显著低于空白对照组，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，与1:0组相比，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠给药15min内的扭体反应次数均显著增高，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。各剂量生川乌水煎剂组中，各给药组小鼠平均扭体次数均显著低于空白对照组，差异有明显统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。与1:0组相比，1:0.25，1:0.5，1:1配伍组小鼠给药15min内的扭体反应次数均显著增高，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。结论：1.生半夏与生川乌配伍可明显降低生川乌的镇痛作用，且与生半夏有明显的剂量依赖性。2.在生川乌剂量及生半夏配伍比例相同情况下，水煎剂的镇痛作用明显弱于水浸剂。3.加热煎煮可明显降低生川乌的镇痛活性。第三部分生半夏对生川乌中生物碱溶出量的影响目的：通过测定生川乌与不同比例生半夏配伍水浸剂和水煎剂中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量，观察生半夏对生川乌生物碱溶出量的影响及与生半夏配伍比例的关系。比较生半夏配伍比例相同的情况下，水浸剂与水煎煮中生物碱溶出量。探讨生半夏降低生川乌毒性、药效与毒效成分溶出量的关系。方法：1.水浸剂的制备：将生川乌与生半夏分别按1:0，1:0.125，1:0.25，1:0.5，1:0.75，1:1，1:2比例配伍，各组均加8倍量水浸泡3次，每次24h,合并滤液，用等体积的乙醚萃取3次，合并萃取液，20℃下挥干乙醚，加二氯甲烷溶解制得水浸剂供试品溶液。2.水煎剂的制备：将生川乌与生半夏分别按1:0，1:0.125，1:0.25，1:0.5，1:0.75，1:1，1:2比例配伍，加8倍量水浸泡2h，煎煮3次，首煎1h，次煎30min，第三次15min，合并煎煮液，用等体积的乙醚萃取3次，合并萃取液，20℃下挥干乙醚，加二氯甲烷溶解制得水煎剂供试品溶液。3.生物碱含量测定：采用HPLC法测定各样品中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。色谱条件为：Hypersil BDS C185μm,4.6mm×250mm色谱柱，流动相为甲醇：水：氯仿：三乙胺(70:30:2:0.1)，流速1.0ml·min-1，柱温30℃，检测波长235nm。结果：乌头碱在1.5μg/ml～25.0μg/ml (r=0.9996)，新乌头碱在17.0μg/ml～85.0μg/ml (r=0.9998)，次乌头碱在16.0μg/ml～160.0μg/ml(0.9996)范围内，线性关系良好。乌头碱在1.5μg/ml～25.0μg/ml (r=0.9996)，新乌头碱在17.0μg/ml～85.0μg/ml (r=0.9998)，次乌头碱在16.0μg/ml～160.0μg/ml(0.9996)范围内，线性关系良好。在生川乌与生半夏按1:0，1:0.125，1:0.25，1:0.5，1:0.75，1:1，1:2比例配伍水浸剂中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的平均含量分别为：1:0为0.02164mg/g，0.08447mg/g，0.12517mg/g；1:0.125为0.01645mg/g，0.06822mg/g，0.10975mg/g；1:0.25为0.01369mg/g，0.05569mg/g，0.09710mg/g；1:0.5为0.01005mg/g，0.04424mg/g，0.06306mg/g；1:0.75为0.00618mg/g，0.03291mg/g，0.034798mg/g；1:1为0.01228mg/g，0.05193mg/g,0.10321mg/g；1:2为0.00359mg/g，0.01221mg/g，0.01837mg/g。各比例组水煎剂中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量极低，液相色谱图中无相关峰。结论：1生半夏与生川乌配伍可显著降低生川乌中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的溶出量，生物碱的溶出量与生半夏的配伍比例呈负相关，提示降低生物碱的溶出量是生半夏降低生川乌的毒性及药效的因素之一。2加热煎煮可显著降低生川乌中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的溶出量。