论文部分内容阅读
目的：研究不同剂量的静脉麻醉药丙泊酚对昆明种小鼠幼鼠神经发育的损伤和学习记忆能力的影响，初步探讨其可能的分子机制，并给予茶氨酸治疗，观察茶氨酸对小鼠学习记忆能力的影响。
方法：首先序贯法测定幼鼠丙泊酚麻醉的ED50和LD50，根据测定的麻醉剂量，选取低、中和高三个剂量进行后续实验。设立脂肪乳组（Con组），丙泊酚低剂量组（Pro1组）、中剂量组（Pro2组）和高剂量组（Pro3组）分别对幼鼠腹腔注射丙泊酚50、100和150mg/kg，90min/次，连续给四次。末次给药0.5h后采用免疫组化法检测大脑不同区域激活型caspase-3和c-Fos蛋白的表达；Western-blot测定大脑海马区域激活型caspase-3、P-Akt和c-Fos蛋白表达水平；分别于末次给药0.5h和16h后硫堇染色观察额皮质区神经元的形态；以跳台实验测定Pro1、Pro2和Pro3组小鼠学习记忆能力；Pro3组分别腹腔注射低剂量茶氨酸1mg/kg(Pro3+T1)、中剂量茶氨酸3mg/kg(Pro3+T2)和高剂量茶氨酸10mg/kg(Pro3+T3)，每天一次，持续14d，分别比较Pro3组与Pro3+T1、Pro3+T2和Pro3+T3组跳台实验的潜伏期和错误次数。
结果：
1序贯法测定幼鼠丙泊酚腹腔ED50和LD50
丙泊酚80mg/kg可以使所有实验小鼠翻正反射消失，丙泊酚ED50为54mg/kg（95％可信限45～67mg/kg），LD50为178mg/kg(95％可信限145～217mg/kg)。
2免疫组化法观察c-Fos和激活型caspase-3蛋白在大脑各区的表达
与Con组比较，Pro2、Pro3组激活型caspase-3蛋白在海马CA1和CA3区表达增加（P＜0.01）；Pro3与Pro2组相比，海马CA1和CA3区激活型caspase-3蛋白表达增加（P＜0.05，或P＜0.01）；与Con组比较，Pro2、Pro3组c-Fos蛋白在额皮质、海马CA1和CA3区表达增加(P＜0.01); Pro3与Pro2组相比，在额皮质、海马CA1和CA3区表达增加（P＜0.01）。
3Westen-blot法检测海马区激活型caspase-3、P-Akt和c-Fos蛋白表达水平
Pro2和Pro3组海马区激活型caspase-3和c-Fos蛋白表达水平明显高于Con组（P＜0.01）。Pro2和Pro3组海马区P-Akt蛋白表达水平明显低于Con组(P＜0.01)。
4硫堇染色法观察额皮质区神经元形态
Con组额皮质区细胞结构清楚，细胞形态无明显改变，胞浆呈蓝紫色，与Con组相比，短时间内Pro1、Pro2和Pro3组均未见明显改变，16h后Pro2和Pro3组观察到局灶性神经元疑似病变，细胞浓染，体积缩小，但病变损伤较轻微。
5跳台实验法检测学习记忆能力
Pro2、Pro3组与Con组比较，跳台实验潜伏期缩短、错误次数增加（P＜0.05）；Pro3+T2和Pro3+T3组与Pro3组相比，跳台实验潜伏期延长、错误次数减少（P＜0.05）。
结论：连续给予幼鼠大剂量丙泊酚麻醉可能通过降低P-Akt和上调c-Fos蛋白的表达，促进幼鼠神经元激活型caspase-3蛋白表达增加，进而引起大脑额皮质区神经元组织病理学改变，从而引起后期学习记忆能力下降；茶氨酸可改善长时间持续大剂量丙泊酚麻醉引起的学习记忆能力降低。