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本研究探讨以重组腺病毒载体(E1区缺失和部分E3区缺失)介导IFN-γ基因转染鼠BMSCs，研究IFN-γ体外表达规律及IFN-γ基因修饰的BMSCs体内抗白血病细胞株K562移植瘤效应。为慢性粒细胞白血病的基因治疗提供一种思路和实验依据。
2.实验方法2.1鼠BMSCs的分离、培养在操净台中取小鼠胫骨，取出骨髓，以DMEM-LG完全培养基(含10％胎牛血清，2mML-谷氨酰胺，100units/ml青霉素，100μg/ml链霉素)重悬细胞，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，每天倒置显微镜下观察细胞生长情况，培养3～4天后，全量换液去除悬浮细胞，贴壁细胞继续培养，每3天半量换液1次。约2周左右培养至达80％融合时，以0.25％胰酶(含0.1％EDTA)在37℃消化，进行传代扩增培养。
2.2Ad/IFN转染BMSCs后体外表达规律检测腺病毒以MOI=50感染骨髓基质细胞。RT-PCR检测IFN-γmRNA的表达。ELISA定量测定转染Ad/IFN-γ的BMSCs培养上清中的IFN-γ蛋白浓度。
2.3Ad/IFN转染BMSCs静脉及皮下应用体内表达规律检测以MOI=50感染骨髓基质细胞，备用于体内实验。将转染后的骨髓基质细胞通过静脉及皮下回输治疗移植瘤模型。
RT-PCR检测各器官的IFN-γmRNA的表达情况。ELISA定量测定转染Ad/IFN-γ的BMSCs治疗后于各器官的IFN-γ表达情况。
2.4Ad/IFN转染BMSCs治疗后抑瘤效应及生存期观察将K562移植瘤模型分为静脉回输Ad/IFNγ-骨髓基质细胞、Ad/LacZ-骨髓基质细胞、未转染的骨髓基质细胞及局部肿瘤注射Ad/IFNγ-骨髓基质细胞四组，测量肿瘤大小观察其抑瘤效应并观察生存期。
2.5Ad/IFN转染BMSCs治疗后毒副反应观察取治疗后第4天移植瘤模型血标本，送我院检验科测生化常规，观察毒副反应。
3.结果3.1BMSCs形态学自原代培养的鼠BMSCs在约10～16天(平均14天)达到90％左右融合，细胞形态上呈均一的长梭形，并可长期传代培养。
3.2Ad/IFN转染BMSCs后体外表达规律检测MOI值为50时，转染Ad/IFNγ的骨髓基质细胞在体外可产生IFNγ，其中第5天分泌达高峰，为24小时21000pg/106细胞，并可获得长期的表达，最多可持续到3周左右。对照组转染Ad/LacZ的BMSCs和未转染的BMSCs不产生IFN-γ。
3.3Ad/IFN转染BMSCs后静脉及皮下应用体内表达规律检测MOI值为50时，转染Ad/IFNγ的骨髓基质细胞在通过静脉回输或局部皮下注射均可产生IFNγ，静脉回输在肝脏中表达量较多，局部注射的则主要在肿瘤组织中表达。
3.4Ad/IFN转染BMSCs治疗后抑瘤效应及生存期观察每组于骨髓基质细胞回输前及回输后每3天用毫米游标卡尺测量裸鼠肿瘤的长、宽最大垂直直径，按如下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)=长×宽2/2，统计学发现统计学意义。生存期观察治疗组明显长于对照组。
3.5Ad/IFN转染BMSCs治疗后毒副反应观察治疗组和对照组生化检测指标未发现统计学差异。4.结论4.1骨髓基质细胞(BMSCs)可成功地在体外进行分离、培养和扩增。
4.2Ad/IFN转染BMSCs后通过RT-PCR检测IFN-γmRNA表达、ELISA检测培养上清中FN-γ的表达等有力地证明了Ad/IFN-γ可成功地转染BMSCs，转染Ad/IFN-γ的MSCs可有效地表达IFN-γ蛋白并分泌至细胞外，并可维持持续三周的表达。
4.3转染Ad/IFNγ的骨髓基质细胞在通过静脉回输或局部皮下注射后通过RT-PCR检测IFN-γmRNA表达、ELISA检测器官匀浆液证实其可成功的归巢于造血组织和肿瘤组织。
4.4转染Ad/IFNγ的骨髓基质细胞于体内有抑瘤效应并能延长其生存期，证实其抗白血病效应。
4.5转染Ad/IFNγ的骨髓基质细胞于体内应用未发现明显毒副作用。