葡萄霜霉病菌快速分子检测方法研究

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葡萄(Vitis L.)是世界上最重要的水果之一,葡萄及葡萄相关产品是世界上和我国的重要农业产业。葡萄霜霉病(Grape Downy Mildew)自十九世纪七十年代随着美洲抗葡萄根瘤蚜砧木的引入传入法国,继而传遍欧洲和全世界,已造成多次重大的灾难,成为葡萄产业健康发展的重要制约因子。自1882年波尔多液发明至今,化学防控一直是控制霜霉病为害、流行、成灾的最主要的措施;多数葡萄产区需要多次、大量施用化学药剂才能成功防控其危害和成灾,这同时也增加了化学药剂产生副作用的风险。预测预报技术是准确防控霜霉病、减少农药施用和精准施用的关键,因此,开展葡萄霜霉病预测预报研究对于科学防治葡萄霜霉病具有重要的意义。分子检测技术为作为预测预报的重要手段,为精准的预测预报提供了分子基础。目前,关于葡萄霜霉病菌[Plasmopara viticola (Berk et Curtis) Ber.et de Toni]的快速分子检测方法的报道几乎是一个“空白”,本研究旨在探索并建立两种高效、快速、特异、灵敏的葡萄霜霉病菌分子检测方法,以期为及时、准确的预测预报葡萄霜霉病的发生和流行提供分子基础。主要研究结果如下:1.成功建立了一套完整的葡萄霜霉病菌LAMP快速检测方法。该方法不仅种间特异性强,且在55min内即可检测到33fg/μl水平的P. viticola基因组DNA,灵敏度是常规PCR检测体系的100倍。2.开发了具有高度的种间特异性的葡萄霜霉病菌锁式探针,探索并初步建立了葡萄霜霉病菌的锁式探针检测法,灵敏度为9.4pg/μl。开发的锁式探针和初步建立的锁式探针检测法为后续多种葡萄致病菌的锁式探针检测技术的集成奠定了基础。3.结合基因组DNA快速提取方法,分别利用所建立的葡萄霜霉病菌的LAMP和PLP检测方法对全国各地区的78份田间样品进行了检测,结果表明:第一,这两种检测方法的准确率高,均为100%;第二,这两种检测方法的适用范围广,适用于在各种区域或生态条件下的各种品种上葡萄霜霉病菌的检测,即:不仅适用于酿酒、鲜食等各种用途葡萄品种组织内霜霉菌的检测,还适用于有核、无核等品种葡萄组织内霜霉菌的检测,不仅适用于不同地区或不同生态区域的相同葡萄品种霜霉菌的检测及相同地区的不同葡萄品种霜霉菌的检测,还适用于不同地区的不同葡萄品种霜霉菌的检测。
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