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【背景与目的】肾细胞癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一,发病率约占成人全身恶性肿瘤的3%,其中80%为透明细胞癌,全球每年大约有200000人死于肾癌,而且发病率和死亡例数仍在不断增加,外科手术是治疗早期肾癌的有效手段之一,包括根治性肾切除术及肾部分切除术,肾癌的总体5年生存率只有50-60%。肿瘤的生长依赖于血管的新生,抑制肿瘤血管生成已经成为肿瘤治疗的一种策略。VEGF可特异性促进内皮细胞增殖、参与血管生成、增加血管通透性等,在动物胚胎发育、伤口修复、肿瘤发生等多种生理及病理过程中发挥重要作用。因此,VEGF及其受体成为目前抗肿瘤血管形成治疗最为成熟的靶分子。RNAi技术不仅在功能基因组研究中发挥了重要用,而且是一种潜在的以特异性基因沉默为方法治疗疾病的手段。尤其在肿瘤的干预中更具有潜在意义。本课题,利用RNAi技术,沉默肾细胞癌细胞中VEGF的表达,抑制肾细胞癌细胞株的增殖、生长、侵袭和迁移,为其临床开发和探索肿瘤治疗的新途径提供实验和理论基础。【方法】化学合成针对VEGF的小干扰RNA,通过脂质体转染至肾癌细胞株ACHN中,收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线、MTT比色法检测细胞增殖,TUNEL方法检测凋亡率(AR)法检测凋亡率(AR),细胞黏附实验和划痕实验测定细胞的黏附及迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力。【结果】siRNA1~2组VEGF蛋白表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,生长曲线表明与空白对照组及阴性对照组相比,siRNA1~2组ACHN细胞的生长明显减慢。在24h、48h、72h,siRNA1组的增殖抑制率分别为18.9%、32.7%、40.3%和siRNA2组增殖抑制率分别为27.6%、50.6%、67.8%均高于空白对照组及阴性对照组(p﹤0.05);siRNA1组的细胞凋亡率为10.7%,15.9%,20.3%和siRNA2组的细胞凋亡率为17.3%,26.2%,37.4%均高于空白对照组及阴性对照组(p﹤0.05);其中siRNA2对ACHN细胞的IR、AR和VEGF蛋白表达的抑制作用均显著高于siRNA2组(p﹤0.05)。细胞黏附试验结果显示,与空白对照组相比;siRNA1~2组的细胞黏附数量明显下降(81.5±3.1% vs 40.5±2.6%, p﹤0.05;81.5±3.1% vs 22.5±2.4% ,p﹤0.05),其中以siRNA2组最为明显;划痕试验表明,与空白对照组相比,siRNA1~2组的细胞迁移数量明显下降(162±9 vs 81±5,p﹤0.05;162±9 vs 38±4,p﹤0.05),Transwell试验结果显示,与空白对照组比较,siRNA1组和siRNA2组肾癌细胞侵袭能力明显下降(P<0.05),且siRNA2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA1组(P<0.05)。【结论】VEGF在肾细胞癌细胞中高表达,且在肾细胞癌细胞株的增殖、凋亡、黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;化学合成的VEGF-siRNA能特异性抑制肾细胞癌ACHN细胞株中VEGF的表达,抑制细胞生长增殖,促进细胞凋亡;可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力。RNAi有望成为肾细胞癌靶向治疗的重要手段。