论文部分内容阅读
暴发性肝功能衰竭（Fulminant hepatic failure，FHF）是一种病死率极高的危重症，肝移植治疗FHF虽然有效，但供体的缺乏和长期使用免疫抑制剂的问题相当突出。由于供体缺乏，许多FHF病人在器官移植前死亡，长期使用免疫抑制剂也会带来许多副作用，而且部分暴发性肝功能衰竭的病人是可以自行恢复的；因此需要发展一种人工肝支持系统提供足够的代谢支持，度过急性期使肝功能恢复或桥接肝移植。本研究将通过原代猪肝细胞的分离与培养获得肝脏特异功能的原代猪肝细胞，建立急性缺血性暴发肝衰犬模型，并应用中空纤维固定化猪肝细胞血液灌流对其进行治疗，初步探讨其对肝衰竭治疗的有效性和安全性。 幼年猪肝细胞分离应用改良胶原酶灌流法，每只猪平均细胞产量为1.55×1010个，Trypanblue拒染实验测定肝细胞存活率为90.2％±2.5％，经动态培养，24小时后，85％以上的肝细胞形成肝细胞球，通过测定培养肝细胞上清液中的白蛋白、BUN浓度，并与空白培养液比较，证实培养肝细胞可保持细胞功能活性达7天，其中前三天活性最高。 肝衰犬模型采用两步缺血法制作，门腔静脉分流48小时后，暂时完全阻断入肝血流1小时。实验证明模型制作成功，生存时间为30.5±20.48小时；各项血液化验指标如：白蛋白、凝血酶原活动度（PT）、纤维蛋白原（FIB）、血浆支链氨基酸和芳香氨基酸的比值（BCAA／AAA）与造模前相比明显下降（P＜0.05），ALT、AST、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、血氨浓度与造模前相比明显升高（P＜0.05）；光镜病理证实了肝细胞变性坏死，肝细胞索排列紊乱;心、脾、肺、肾等脏器的病理结果证实模型死于肝衰竭后的多脏器功能衰竭。 在成功分离培养肝细胞，建立肝衰犬模型基础上，应用培养猪肝细胞与中空纤维舱构成生物反应器，对肝衰犬进行体内灌流实验（生物型人工肝组，BAL组，n二5），并与不加肝细胞中空纤维舱空转流（对照组，n=3）进行比较，灌流治疗持续16小时。结果表明:BAL组生存时间（9 6.2士33.12小时）比对照组生存时间（37士9.93小时）明显延长（只0.05）;经BAL治疗12小时后，肝衰犬血总胆红素、直接胆红素与治疗前相比明显下降（尸叱0.05），明显低于对照组（尸<0 .05）;血氨浓度经BAL治疗8小时后与治疗前相比明显下降（P<0 .5），且明显低于对照组（P<0.OS）;凝血酶原活动度经BAL治疗后16小时明显上升，高于照组（P<0.05）;灌流前后血常规、电解质无明显变化（P>0.05），灌流治疗期间无免疫排斥反应;以上实验结果表明BAL治疗FHF是安全的、有效的。 综合以上实验结果，我们认为:应用改良胶原酶灌流法分离幼年猪肝细胞，可获得高产量、高活性的原代猪肝细胞，经培养可保持很高的功能活性;以培养的原代猪肝细胞和中空纤维舱构成BAL，对肝衰犬进行治疗，能显著改善肝衰犬的各项生化指标，延长生存时间，并且无免疫排斥反应;因此这种BAL是安全的、有效的，有望应用于临床。