目的：CD40配体(CD40L)属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族中重要的成员之一，在体内主要表达在CD4+T淋巴细胞表面，包括TH0、TH1、TH2细胞亚群，与为肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员的其受体CD40特异性结合发挥生物学效应，CD40主要在B淋巴细胞上表达，并且在多种肿瘤细胞包膜上也有表达。CD40L-CD40是体内特异免疫系统一对重要的共刺激分子，在机体的体液和细胞免疫、炎症、移植免疫及心血管疾病等病理反应中起重要作用，CD40L—CD40结合可以激活体内抗肿瘤免疫反应，诱导肿瘤细胞凋亡；但用单纯CD40L外源裸质粒不能与体内细胞很好结合，现大部分研究为应用逆转录病毒和腺病毒作为载体，而脂质体作为新型药物载体，能包裹抗生素、抗真菌药、化疗药物、生物制剂等，能改变药物的水溶性、体内分布和体内代谢。目前尚无脂质体包裹CD40L抗肿瘤的实验报道。本实验中，我们将pORF-CD40L通过用纳米脂质体包裹，制备成纳米脂质体pORF-mCD40L，观察其体内外抗肿瘤效应，研究联合化疗后对肿瘤治疗的联合增效作用，并进一步研究其抗肿瘤机制。方法：体外实验我们进行了肿瘤生长抑制实验(MTT)，定量分析各种干预方式对肿瘤生长的抑制程度；另外以流式细胞仪测定体外各种干预下肿瘤细胞的凋亡情况。体内实验我们建立了皮下移植瘤、肺转移及恶性腹水动物模型，观察了联合治疗(联合顺铂5mg／kg／只，每周一次)及质粒单独治疗在抗肿瘤治疗中的作用，在皮下移植瘤模型中，我们又建立了CT26及LL／2两种肿瘤模型，两种模型均用纳米脂质体包裹的pORF-mCD40L质粒(50μg／只)肿瘤内注射治疗小鼠皮下移植肿瘤；在肺转移模型，我们则用BALB／c小鼠尾静脉注射CT26结肠癌细胞制成，尾静脉注射药物观察抗肿瘤治疗效果；腹水动物模型我们选用H22肝癌细胞注入KM小鼠腹腔来形成，各治疗组腹腔内注射药物观察腹水生长的不同抑制程度。结果：1．MTT实验结果显示，对CT26结肠癌细胞，脂质体包裹的pORF-mCD40L联合顺铂能明显抑制肿瘤的生长，与对照组相比有明显的差别。2．CT26结肠癌细胞接种六孔板以脂质体包裹的pORF-mCD40L等作用，以流式细胞仪测定各组肿瘤细胞的凋亡并比较，结果显示，经pORF-mCD40L作用后肿瘤细胞凋亡明显增加。3．在LL／2 Lewis肺癌C57BL／6皮下移植瘤模型和CT26结肠癌BALB／c皮下移植瘤模型中我们均可观察到联合治疗抗肿瘤效果较单一治疗和NS对照治疗显著增强。在LL／2Lewis肺癌模型中，有1只小鼠的肿瘤治疗后曾经完全消退；CT26结肠癌有模型中，有1只小鼠的肿瘤治疗后完全消退；并且联合组生存期明显延长。另外联合治疗组肿瘤组织的免疫组化显示治疗组肿瘤细胞膜有较强的CD40L表达，血清中INF-γ的分泌在联合治疗组较对照组明显增高；淋巴细胞杀伤活性也明显增高。腹水联合治疗组有4只小鼠腹水最后消失；CT26肺转移模型中联合治疗组治疗后肺转移结节在每只动物肺上只有1—2个，明显少于对照组，并且生存期大大延长。在作用机理探讨中，我们对肿瘤的凋亡及治疗小鼠的免疫状况也进行了研究，通过对肿瘤组织进行凋亡染色(TUNEL)和HE染色，我们观察到联合治疗诱导肿瘤细胞凋亡的作用增强，使肿瘤组织淋巴细胞浸润增多。再通过淋巴细胞杀伤试验，检测了小鼠脾脏的T淋巴细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用。结论：通过以上试验，我们研究了通过纳米脂质体包裹pORF-mCD40L基因来增强其转染效果并联合顺铂化疗进行联合治疗，观察到其能够抑制肿瘤生长、延长荷瘤小鼠的生存时间，增强诱导肿瘤细胞凋亡的作用，激活机体的细胞免疫反应，抑制肿瘤的转移及腹水的形成。目的是通过我们的实验以期达到探索肿瘤基因治疗的新思路、基因载体的选择及可能的肿瘤治疗范围。