本文建立了燕窝蛋白的分步提取方法,构建了离线SCXxRP二维液相色谱系统,有效的分离了燕窝中蛋白质提取物。通过比较其它四种方法,选定了燕窝蛋白的最适提取方法为分步提取法。利用单因素实验和正交试验优化得到分步提取的最佳条件为：燕窝样品经1：40料液比溶解,60℃,超声40min,离心,收集上清液,残渣重复提取一次,合并两次上清液,固体残渣再依次用相应浓度的NaC、NaOH和HCl溶液以上述方法提取,上清液分别在去离子水中透析48h,然后将透析液合并进行冷冻干燥,从而得到燕窝蛋白粗品。测定了四种燕窝样品提取液中的糖含量约为3%,蛋白质提取率约为6%,约为常见提取方法的2倍。凝胶电泳实验表明所提取的蛋白质分子量在35-116kDa的范围内,并扫描了各个样品的紫外吸收光谱。本文针对四种燕窝蛋白样品进行了一维的离子交换色谱(SCX)和反相色谱(RP)分析,结果表明两种分析方法都不能达到很好的分离效果。在此一维分析的基础上,本实验构建了SCXxRP的离线二维液相系统。系统中第一维采用SCX色谱,30min内盐浓度由0线性增加至100%,每5min对样品组分进行一次切割,共6次切割,在第一维和第二维之间以组分收集器收集第一维洗脱的样品组分。收集的组分经过冻干处理,复溶后逐一导入第二维RP色谱中,40min内乙腈浓度由0线性增加至100%。整个二维系统的出峰数量和系统分辨率都比一维的单个分离大大增加,达到了很好的分离效果。利用本文所构建的二维液相系统对四种样品进行了分析,结果表明四种样品在3个切割段内共出现了7个相同的特征峰,证明了燕窝蛋白经过二维液相检测后呈现了一定的相似性。从对7个特征峰的重现性实验表明,本实验所构建的离线二维液相系统具有较高的稳定性,说明本文所建立的离线二维液相的分析方法可以有效用于燕窝蛋白质的分离。