BN137菌株发酵产纳豆激酶的条件及酶的分离纯化、理化性质的研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:firelord128
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BN137菌株是从日本纳豆食品中分离出的一种杆菌,该菌株在适宜条件下可产生具有强纤溶活性的酶(暂称该酶为纳豆激酶)。 本论文围绕产生纳豆激酶的菌株BN137的发酵条件,纳豆激酶的分离纯化及理化性质等展开系列研究。 在考察了该菌株各项发酵条件之后,确定BN-137菌株的最佳发酵温度为35℃,初始发酵pH值为8.0,最佳发酵终止时间为60小时。为了提高发酵产量,通过均匀设计,得到了优化的培养基配方。采用该发酵培养基后,酶产量可达3240IU/ml,是优化前的1.54倍。 通过测定发酵曲线,发现:该菌株有二次生长现象,而且发酵液中的酶活与pH值密切相关。 通过硫酸铵分级沉淀、DEAE sephadexA-50阴离子交换凝胶层析和sephadexG-75凝胶柱层析对发酵液进行分离和纯化,并得到电泳纯的酶。分离过程酶的总收率为35%,提纯倍数为54.9。 以酪蛋白为底物,反应pH为7.8,反应温度是40℃时,纳豆激酶的米氏常数Km=5.490×10-3g/ml。 经SDS凝胶电泳和凝胶过滤层析两种方法测定该酶的分子量分别为33113Dalton和28840Dalton;其等电点pI=8.6±0.3。 选用纤维蛋白平板法作为检测酶溶纤活性的方法,进行了一系列的理化性质测定,结果表明: 酶水溶液对温度敏感,不宜常温保存。 沈阳药科大学硕士学位论文 摘要 酶促反应最适pH值是pH7J 该酶在pH7司 范围内稳定。 多种金属盐对纳豆激酶有保护作用,AgNO卜HgC!会使酶严重失活。 纳豆激酶的活性不受 N a S*。和 E D TA的干扰。 经原料药稳定性试验证明酶的冻干粉适宜在低温干燥的条件下保存。
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