结直肠癌（colorectal cancer, CRC）是消化系统常见的恶性肿瘤之一，在我国大肠癌的发病率居全国恶性肿瘤的第四位，且发病率呈逐年上升的趋势，同时其发病年龄趋向老龄化。近年的流行病学资料显示，全世界CRC新发病例数占全部恶性肿瘤新发病例数的9.4%。而随着经济的发展、生活水平的提高和生活方式的改变，CRC的发病率还将呈不断上升的趋势。目前CRC的治疗是以手术为主，辅以放、化疗治疗。一方面，肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药性（multidrug resistance，MDR）是化疗失败并导致肿瘤复发和患者死亡的主要原因之一，且标准化疗后产生的肿瘤细胞耐药性，仍然是临床治疗的难题。尽管各种新的化疗药物和治疗方案不断地产生及应用，并在某些恶性肿瘤的治疗上取得成功，但在大多数最常见的恶性肿瘤中收获不大。临床上许多肿瘤在经过最初有效的化疗后，又再复发，多发癌化疗者效果差，其原因是肿瘤细胞对化疗的耐药性。肿瘤耐药是一个多基因、多因素和多步骤的复杂过程，P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是多药耐药基因MDR1编码产物，其高表达是产生多药耐药性的主要原因之一，也是目前研究最为广泛、最为深入且在临床实践中唯一得到证实的耐药机制，克服此障碍，肿瘤化疗将取得决定性突破；另一方面，现代循证医学已证明化疗不仅可以改善患者预后，而且还可以延长肿瘤患者生存期，然而化疗过程中所用的药物如糖皮质激素、环磷酰胺、顺铂、卡铂、长春新碱和紫杉类可不同程度引起糖耐量异常，甚至诱发糖尿病，使化疗不能如期进行，影响患者的生存与生活质量。研究表明沉默信息调节因子1（silent mating type informationregulator1，SIRT1）参与肿瘤的耐药过程，所以探讨SIRT1、耐药基因在CRC中的表达不仅可以了解CRC患者自身耐药情况，而且对术后应用化疗药物具有重要的指导作用。研究表明凋亡是一个受多基因调控的过程，CRC的发生、发展与肿瘤细胞凋亡密切相关。Survivin蛋白是凋亡抑制基因家族（inhibitor ofapoptosis, IAP)中的一员，具有抑制凋亡作用，参与细胞周期的调控，其高表达可抑制多种因素诱导的细胞凋亡，与肿瘤的发生、发展密切相关。SIRT1和Survivin是目前研究较为广泛的抑制细胞凋亡的基因，可通过不同的途径抑制细胞凋亡，二者高表达均提示肿瘤患者预后不良。由于细胞凋亡过程的复杂性，二者是否存在一定的关联性已引起了学者的研究，目前国内尚未见二者的相关性研究。本研究的目的就在于通过分析SIRT1与耐药相关基因蛋白表达的相关关系，为逆转多药耐药提供新的理论依据。通过抑制SIRT1的功能或下调SIRT1的表达来研究新的靶点药物，不仅可抑制肿瘤的发生及改善肿瘤的耐药性，还可避免应用其他化疗药物诱发的糖尿病，从而为结直肠癌的治疗提供理论依据；同时通过分析SIRT1和Survivin的表达，探讨二者在CRC形成中的作用及二者的相关性。第一部分结直肠癌中SIRT1与耐药基因的表达及临床意义目的：研究沉默信息调节因子1（silent mating type information regulator1，SIRT1）在CRC中的表达，分析SIRT1与CRC患者相关临床病理指标及P53、多药耐药基因P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽转移酶（GST-π）、DNA拓扑异构酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）之间的关系，明确SIRT1在CRC发生发展中的作用，并探讨SIRT1与CRC耐药的关系，为CRC的化疗提供线索，为临床治疗及药物研发寻找新的靶点提供实验依据。方法：选取2007年3月至2012年4月在保定市第一中心医院接受手术治疗的219例CRC患者，筛选出60例CRC患者诊断明确，术前均未经任何抗癌及内分泌治疗，均经外科手术切除后送检病理检查，证实为原发性CRC，且为首发，均无心脑血管疾病，均未合并其他系统疾病，病理资料完整。对照组为距离肿瘤至少5cm的经镜下证实均未被肿瘤细胞侵及的24例正常结直肠黏膜组织。将筛选出的60例CRC患者的完整病例资料进行整理，其中包括性别、年龄、TNM分期、临床分期、组织学分级以及免疫组化病理报告结果包括P53、P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ等指标，并进行查漏登记，将资料进行整理，发现有些病例免疫组化结果中无P53、P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱ，遂将相应病例的组织蜡块挑出，与SIRT1同时行免疫组化检测。应用SPSS17.0统计软件处理数据，计数资料采用χ2检验，相关性采用Spearman相关分析，均以α=0.05作为检验标准，P＜0.05为差异有统计学意义。结果：1结直肠癌组织中SIRT1阳性表达率明显高于癌旁正常结直肠组织，差异有统计学意义（P<0.05）。2结直肠癌组织中，SIRT1阳性组中P-gp蛋白表达水平明显高于SIRT1阴性组（P<0.05），且SIRT1表达与P-gp的表达呈显著正相关（P<0.05）。SIRT1阳性组织中GST-π、TOPO-Ⅱ表达率与SIRT1阴性组织相比，差异均无统计学意义（P>0.05）。3结直肠癌患者SIRT1的表达与肿瘤浸润深度（P=0.021）、淋巴结转移（P=0.020）、pTNM分期（P=0.003）均成正相关，SIRT1的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学分级、远处转移、CEA含量之间差异均无统计学意义（P>0.05）。肿瘤浸润深度T3～T4者比T1～T2者表达阳性率高（P＜0.05）、淋巴结转移者比无转移者SIRT1阳性表达率高（P＜0.05），pTNM分期高者比分期低者SIRT1阳性表达率高（P＜0.05）。结论：SIRT1在结直肠癌组织中高表达，与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期、P-gp表达有关，提示SIRT1参与结直肠癌的发生发展及耐药过程，其表达可能影响肿瘤的生物学特性，SIRT1测定或将成为判定结直肠癌恶性程度及评估预后的生物学指标。第二部分结直肠癌中SIRT1和Survivin的表达及临床意义目的：观察SIRT1、凋亡抑制基因Survivin在结直肠癌中的表达，分析SIRT1、Survivin的表达与临床病理学特征的关系，并探讨二者之间的相关性。方法：通过免疫组化技术检测SIRT1、Survivin分别在60例CRC和24例CRC癌旁正常组织中的表达情况，分析CRC中SIRT1与Survivin的相关性。采用SPSS17.0统计软件处理数据，计数资料采用χ2检验，各指标的相关分析采用Spearman等级相关分析，均以α=0.05作为检验标准，P＜0.05为差异有统计学意义。结果：免疫组化结果：1结直肠癌组织中Survivin阳性表达率明显高于癌旁正常结直肠组织，差异有统计学意义（P<0.05）。2结直肠癌组织中，SIRT1阳性组中P53蛋白表达水平明显高于SIRT1阴性组（P<0.05），SIRT1表达与P53的表达呈显著正相关（P<0.05）；Survivin阳性组中P53蛋白表达水平高于Survivin阴性组，二者差异无统计学意义（P＞0.05），Survivin表达与P53的表达无明显相关性。3SIRT1阳性表达组中Survivin阳性表达率高于SIRT1阴性表达组，二者差异无统计学意义（P＞0.05），SIRT1表达与Survivin的表达无明显相关性。4结直肠癌患者Survivin的表达与pTNM分期（P=0.035）成正相关，Survivin的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学分级、浸润深度、远处转移、淋巴结转移、CEA含量之间差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：SIRT1和Survivin均可能参与了CRC的发生、发展过程，其高表达提示肿瘤恶性程度高，预后不良，有可能成为CRC的重要标记物。SIRT1和Survivin是抑制细胞凋亡的两种基因，但通过不同的途径抑制细胞凋亡，由于细胞凋亡过程的复杂性，本研究中并未发现二者存在一定的关联性。