高龄动物自体细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

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研究背景 细胞移植治疗终末期冠心病是近年来“血管新生”治疗和研究领域的一大热点。已经有较多试验表明自体细胞移植会在很大程度上改善缺血心脏的心功能。但是目前几乎所有的研究,所采取的移植细胞源均来自较年轻的动物。而随着人口日益高龄化和冠心病心肌梗死发生的流行病学资料,细胞移植治疗如果应用到临床,那么将所要面对的相当多的患者将是老年人群。那么,随着年龄的衰老,从老年人群获取的自体细胞是否还具有足够的生长扩增能力、老年自体干细胞是否还具有很好的诱导分化能力、老年自体细胞移植是否还能改善心功能呢?本研究利用同源Lewis大鼠制作心肌梗死模型,模拟衰老细胞的自体移植过程,就此问题进行了初步探讨。 方法 体外试验部分:所使用的动物均为同源雄性Lewis。以24月龄作为老年组,其余分别为:幼年组(2周龄)、青年组(5月龄)和中年组(10月龄)。不同年龄组的成肌细胞、平滑肌细胞以及骨髓间质细胞被采集并进行培养。同期进行青年和老年细胞生长曲线的比较。针对骨髓来源的细胞,每一万个新鲜采集的细胞铺种在间质干细胞生长液。每一千个新鲜采集的细胞铺种在血液祖细胞生长液之中,培养一周后对形成的克隆形成单位计数,来初步评价不同年龄段骨髓中含有间质干细胞和血液祖细胞数目。老年骨髓间质细胞培养后给予10 mmol/L 5—氮胞苷诱导,然后使用结蛋白染色评价细胞向肌源性分化的能力。老年平滑肌细胞使用平滑肌—α—肌动蛋白染色评价所获得细胞的纯度。拟移植的细胞总量的三分之一在移植前一天与0.4%5-嗅尿嘧啶液共同孵育过夜。 体内试验部分:青年Lewis大鼠左进胸结扎冠脉左前降支近端制作心肌梗死模型。术后三周心脏超声检查,只有出现明显左室前壁变薄以及EF<50%、FS<30%的动物才予以保留进入下一轮的细胞移植实验。合格的心梗动物随机分为3组,即高龄平滑肌细胞(n=11)、高龄骨髓间质细胞移植组(n=9)和对照组(n=6),在疤痕正中区注射含三百五十万个的50微升细胞悬液(细胞移植组),对照组注射同等容量的无血清的细胞培养液。细胞移植后第五周,再次心超检查。记录心脏左室射血分数和缩短分数,记录左室收缩期末和舒张期末直
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