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霍山石斛(Dendrobium huoshanense)是我省特有的传统名贵中药材,药食两用历史悠久,大量研究表明,霍山石斛对与高血糖、高血压、高血脂、肥胖症、脂肪肝等慢性代谢性疾病相关的炎性免疫具有调节功能,可有效改善身体健康状况。半仿生提取法,和阴离子交换树脂脱蛋白法生产成本低、易于放大,操作过程绿色安全,适合霍山石斛主要活性成分——霍山石斛多糖(DHP)的精制。本文建立并优化了霍山石斛多糖精制工艺,并对通过该精制工艺制备的多糖进行化学成分分析和抗炎活性评价,主要研究内容及结果如下:(1)霍山石斛有效成分半仿生法提取工艺的优化采用单因素试验和正交试验优化了霍山石斛有效成分半仿生法提取工艺。优化工艺条件为:模拟胃液提取部分料液比1:30,提取温度80℃,提取时间1.5 h,模拟肠液提取部分料液比1:30,提取温度80℃,提取时间2.5 h。在此条件下多糖的得率为60.9±1.2 mg/g,较传统水提法多糖得率提高了16.55%。(2)霍山石斛多糖阴离子交换树脂脱蛋白工艺的优化采用单因素试验和正交试验优化了霍山石斛多糖阴离子交换树脂脱蛋白工艺。优化条件为:p H 8.5,温度35℃,缓冲液浓度0.02 mol/L,多糖浓度0.8mg/m L的多糖溶液,体积流量为2 BV/h,径高比为1:9,最大上样量为40 m L。(3)霍山石斛多糖化学成分分析采用HPLC法测定霍山石斛多糖分子量,乌氏粘度计测定多糖的粘度,PMP柱前衍生化法测定霍山石斛多糖单糖组成。霍山石斛精制多糖(DHP-2)与传统方法制备的霍山石斛多糖(DHP-1)相比,粘度更大,数均分子量(Mn)相差不大,DHP-2的重均分子量(Mw)要明显大于DHP-1的重均分子量,DHP-2的分子量分布更宽。两种多糖的单糖组成相同但各个单糖间摩尔比有差异。(4)霍山石斛精制多糖抗炎活性评价采用MTT法比较霍山石斛精制多糖对RAW264.7细胞生长的影响,通过RAW264.7细胞NO及IL-1β释放的情况和i NOS和IL-1βm RNA表达情况考察霍山石斛精制多糖的抗炎活性。结果表明,霍山石斛精制多糖能抑制炎症因子NO及IL-1β的分泌,降低i NOS和IL-1βm RNA的表达,相比而言,霍山石斛精制多糖的抗炎活性要优于传统方法制备的多糖。