植物miRNA-168a跨界调控人基因表达再分析

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植物micro RNAs(mi RNAs)跨界调控人基因表达现象首次发现于2011年,植物源性食物中的mi RNA-168a可经肠胃道进入血液循环到达肌体各个组织,在哺乳动物肝细胞中靶向抑制低密度脂蛋白衔接蛋白受体1(LDLRAP1)的翻译表达,从而影响血脂代谢。然而,目前食物中植物源性的mi RNAs存在的跨界调控人基因表达现象只发现了两个靶点,也只研究了与之对应的两个植物mi RNA。mi RNAs跨界调控靶点预测研究的滞后性以及有限的参考文献是这一研究领域发展缓慢的重要原因。本研究在概括了mi RNA跨物种调控的内容与机制的基础上系统性分析了现有mi RNA靶点预测的计算机学习原则,针对植物mi RNA跨界调控人基因表达靶点预测方面的功能与分析限制,本研究归纳了从NCBI现有数据中挖掘mi RNA-168a跨界调控靶点的研究方法,在南京大学张辰宇教授课题组mi RNA-168a靶点预测的基础上新增了近18个非重复性靶点,为后续研究mi RNA跨界调控的科研工作者提供有用借鉴。进一步的数据分析发现mi R-168a在人体细胞内具有潜在调控靶点,慢型骨骼肌肌球蛋白结合蛋白C(MYPBC1),该基因表达的MYBPC1接头蛋白在运动能量提供中具有重要作用,我们设计了镶有mi RNA-168a与MYBPC1的m RNA结合位点的绿色荧光报告基因以及对照实验,重组荧光质粒与mi RNA-168a双转染DU145细胞后,发现实验组绿色荧光强度确实有降低,且后续A549细胞中的MYBPC1蛋白免疫印记实验也证明了mi RNA-168a对MYPBC1具有下调作用,因此,本研究初步确定了mi RNA-168a对MYBPC1具特异性的有负调控作用;最后,通过CCK-8试剂检测转染mi R-168a后对癌细胞SH-SY5Y和22RV1增殖的影响,研究发现处理后的细胞活性具有一定的变化规律,然而,其内在调控机制有待进一步研究。
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