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目的:分析导师杨传华教授治疗老年高血压共病轻度认知障碍的核心药对,找出核心药对干预血管紧张素Ⅱ诱导的神经损伤的lncRNA的表达谱,筛选出有潜在调节作用的lncRNA,为后期进一步深入研究、发现新的药理机制提供依据.
方法:1.收集导师门诊老年高血压共病轻度认知障碍患者资料,统计组方规律并结合现代药理学研究的成果,筛选出治疗本病的核心药对.2.借助整合药理学平台(TCMIP),找出核心药对的已知的活性成分,预测二者干预高血压和认知障碍相关的靶点,作为实验前的预测评估.3.应用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测药物神经细胞保护作用的物质基础研究,探寻拮抗血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的有效成分.通过药物吸收的主要原理来确定可吸收成分,借助生物信息学分析这些成分的作用靶点,预测其作用机制.4.MTT法筛选药对的有效部位和最佳有效部位的配伍比例.进一步通过流式细胞仪、seahorse细胞能量代谢实验分别观察对SH-SY5Y增殖、凋亡及能量代谢的影响.5.检测中药药对的有效部位干预AngⅡ诱导的SH-SY5Y中lncRNA的表达谱,使用GO和KEGG等生物信息学分析方法研究lncRNA的调控机制.筛选关键lncRNA进行验证分析.
结果:1.共收集导师门诊老年高血压共病轻度认知障碍患者一般资料及处方102首.共选用中药124种,1369味次,平均每方11.04味次.使用频率超过40次的有11味药物:当归、黄芪、泽泻、刺蒺藜、牛膝、杜仲、酸枣仁、黄芩、桑寄生、黄连、丹皮,筛选得到核心药对杜仲-刺蒺藜药对.2.TCMIP结果显示杜仲-刺蒺藜干预高血压和认知障碍的有效成分有26个,涉及39个关键靶标,30个核心通路.主要参与循环系统与神经系统功能调节,与炎症、氧化应激以及与衰老的线粒体功能障碍相关.3.LC-MS/MS结果显示,刺蒺藜有效成分与调节炎症、氧化应激以及与衰老的线粒体功能障碍相关.4.MTT法筛选杜仲、刺蒺藜的有效部位和浓度的配伍比例,栀子苷(0.1mg/L)与刺蒺藜乙酸乙酯Fr.10(5mg/L)比例为1∶1时最佳.5.基因测序得到差异lncRNA和差异mRNA,分析显示lncRNA或是通过影响鞘脂代谢通路改善神经细胞损伤.
结论:1.老年高血压共病认知障碍的病位在肝、肾,病理性质为本虚标实,以肝肾亏虚为本,瘀热、痰热为标.2.肝肾亏虚,血脉不利,脑神失养是老年高血压共病认知障碍的核心病机,治疗多以滋补肝肾为基础,兼以清热泻火、活血化瘀、理气祛痰.基于导师的用药经验,使用药物性味多是温、寒,以甘、苦、辛为主,归肝、肾经.结合现代药理学的研究成果,筛选出具有降压和神经保护的药对,即杜仲-刺蒺藜药对.3.杜仲-刺蒺藜的降压和神经保护机制与LncRNA的调控作用相关.生物信息学分析结果显示,lncRNA很可能是通过调控鞘脂代谢信号通路发挥调控作用.LncRNAENST00000437438通过调控NEU4的表达,影响鞘脂代谢.
方法:1.收集导师门诊老年高血压共病轻度认知障碍患者资料,统计组方规律并结合现代药理学研究的成果,筛选出治疗本病的核心药对.2.借助整合药理学平台(TCMIP),找出核心药对的已知的活性成分,预测二者干预高血压和认知障碍相关的靶点,作为实验前的预测评估.3.应用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测药物神经细胞保护作用的物质基础研究,探寻拮抗血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的有效成分.通过药物吸收的主要原理来确定可吸收成分,借助生物信息学分析这些成分的作用靶点,预测其作用机制.4.MTT法筛选药对的有效部位和最佳有效部位的配伍比例.进一步通过流式细胞仪、seahorse细胞能量代谢实验分别观察对SH-SY5Y增殖、凋亡及能量代谢的影响.5.检测中药药对的有效部位干预AngⅡ诱导的SH-SY5Y中lncRNA的表达谱,使用GO和KEGG等生物信息学分析方法研究lncRNA的调控机制.筛选关键lncRNA进行验证分析.
结果:1.共收集导师门诊老年高血压共病轻度认知障碍患者一般资料及处方102首.共选用中药124种,1369味次,平均每方11.04味次.使用频率超过40次的有11味药物:当归、黄芪、泽泻、刺蒺藜、牛膝、杜仲、酸枣仁、黄芩、桑寄生、黄连、丹皮,筛选得到核心药对杜仲-刺蒺藜药对.2.TCMIP结果显示杜仲-刺蒺藜干预高血压和认知障碍的有效成分有26个,涉及39个关键靶标,30个核心通路.主要参与循环系统与神经系统功能调节,与炎症、氧化应激以及与衰老的线粒体功能障碍相关.3.LC-MS/MS结果显示,刺蒺藜有效成分与调节炎症、氧化应激以及与衰老的线粒体功能障碍相关.4.MTT法筛选杜仲、刺蒺藜的有效部位和浓度的配伍比例,栀子苷(0.1mg/L)与刺蒺藜乙酸乙酯Fr.10(5mg/L)比例为1∶1时最佳.5.基因测序得到差异lncRNA和差异mRNA,分析显示lncRNA或是通过影响鞘脂代谢通路改善神经细胞损伤.
结论:1.老年高血压共病认知障碍的病位在肝、肾,病理性质为本虚标实,以肝肾亏虚为本,瘀热、痰热为标.2.肝肾亏虚,血脉不利,脑神失养是老年高血压共病认知障碍的核心病机,治疗多以滋补肝肾为基础,兼以清热泻火、活血化瘀、理气祛痰.基于导师的用药经验,使用药物性味多是温、寒,以甘、苦、辛为主,归肝、肾经.结合现代药理学的研究成果,筛选出具有降压和神经保护的药对,即杜仲-刺蒺藜药对.3.杜仲-刺蒺藜的降压和神经保护机制与LncRNA的调控作用相关.生物信息学分析结果显示,lncRNA很可能是通过调控鞘脂代谢信号通路发挥调控作用.LncRNAENST00000437438通过调控NEU4的表达,影响鞘脂代谢.