肾移植术后巨细胞病毒抗原血症检测及其应用

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:honghongjiang
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[目的]巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)是肾移植术后感染的主要病毒之一,尽管近年来CMV感染的诊断和治疗都不断进步,但CMV感染仍然是肾移植患者术后并发症、移植肾失功和死亡的主要原因。低基质磷酸化蛋白65(Low matrix phosphoprotein,pp65)是由 CMV UL 83 基因编码的、分子量为 65kd 的被膜蛋白,是CMV活动性感染时产生最多的病毒蛋白。CMV pp65抗原血症检测的方法能够早期检测CMV,对肾移植后CMV活动性感染的诊断及指导临床治疗具有重要价值。本研究的目的是建立间接免疫荧光法的CMV pp65抗原血症检测方法,并与血清学检测IgG抗体、聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测CMV DNA进行比较,然后将该方法应用于肾移植患者,评估CMV pp65抗原血症检测方法与肌酐、他克莫司药物浓度(FK-506)、及淋巴细胞亚群的相关性。[方法]1.CMV pp65抗原血症检测方法的建立通过BD Multitest溶血素将裂解红细胞、固定、渗透一步完成,然后用santa公司抗HCMV pp65单克隆抗体(1-L-11)及biosharp公司FITC标记羊抗鼠IgG抗体采用间接免疫荧光法检测CMV pp65抗原。2.几种CMV检测方法的比较选取2021年9月-2021年12月在昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样完成CMV pp65抗原血症检测,同时完成标准试剂盒CMV BriteTM Turbo Kit的pp65抗原检测、CMV IgG、IgM抗体检测及CMV DNA检测,将几种方法的检测结果进行比较。3.CMV pp65抗原血症检测方法在肾移植患者中的应用在对2021年9月-2021年12月在昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样完成CMV pp65抗原血症检测的同时,检测病人的服药前他克莫司(Tacrolimus,FK-506)药物浓度、肌酐、淋巴细胞亚群等项目,分析CMV pp65抗原血症检测方法在肾移植患者中的应用。4.实验数据统计分析采用SPSS V21.0对数据资料进行统计分析,计量资料用X±S表示,采用t检验比较两组间差异。不符合正态分布数据采用Box-Cox转换成正态分布数据。P<0.05,表示具有统计学意义。计数资料率的组间比较采用卡方检验。配对计数资料采用McNemar检验与Kappa检验。[结果]1.建立了 CMV pp65抗原血症检测方法,一步裂解红细胞、固定、渗透,然后间接免疫荧光法染色,在荧光显微镜下观察黄绿色细胞为阳性细胞。2.自建CMV pp65抗原血症检测方法与CMV BriteTM Turbo Kit标准试剂盒结果比较具有一致性。Kappa值为0.650(Kappa>0.4)。3.CMV pp65抗原血症检测结果与CMV DNA检测结果一致性为65.5%,P<0.05,差异具有统计学意义;CMV pp65抗原血症检测结果与CMV IgG抗体检测结果一致性为57.3%。P>0.05,差异不具有统计学意义。4.CMV pp65抗原血症结果与肌酐、FK506药物浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与NK细胞绝对值比较,差异有统计学意义(P<0.05),CMV pp65抗原血症与淋巴细胞亚群其他项目无统计学意义(P>0.05)。[结论]1.实验室建立了 CMV pp65抗原血症的检测方法。实验室自建方法与参比方法比较,具有一致性,可在临床推广使用。2.CMV pp65抗原与CMV DNA结果一致性为65.5%,两种方法联合检测,对提高CMV感染临床诊断准确率具有一定意义。3.在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,血清肌酐水平、全血FK506药物浓度两组间差异无统计学意义。4.在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,NK细胞绝对值差异具有统计学意义,NK细胞绝对值偏高的肾移植患者,发生CMV感染的概率偏低。
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