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目的探讨银杏叶提取物(EGb)对缺氧/复氧所致心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路的作用机制。方法(1)原代培养大鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧心肌细胞模型,分为4组:①对照组:包括空白对照组(Con组)与高剂量EGb对照组(C160);②缺氧/复氧组(H/R组);③EGb预处理组:包括低剂量EGb预处理组(EGb40组)、中剂量EGb预处理组(EGb80组)以及高剂量EGb预处理组(EGb160组);④Nrf2抑制剂-全反视黄酸(All-trans retinoic acid,ATRA)组(ATRA组)。(2)采用MTT法检测各组细胞活力,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞的MDA含量,SOD活力,GSH、GSSG含量,并计算GSH/GSSG比值以及GSH/GSSG氧化还原电势(Eh GSH/GSSG)。(3)采用实时荧光定量PCR、Western blot(WB)法分别检测Keap1、Nrf2、GCLC及GSTP1的m RNA及蛋白表达水平。结果(1)与Con组相比,H/R组的MDA含量、Eh GSH/GSSG明显升高(P<0.01),细胞活力、GSH/GSSG比值及SOD活力明显降低(P<0.01)。EGb40、EGb80和EGb160组的MDA含量、Eh GSH/GSSG较H/R组明显降低(P<0.01),细胞活力、GSH/GSSG比值及SOD活力则明显升高(P<0.01),且呈浓度依赖性(P<0.01)。ATRA组的细胞活力、GSH/GSSG比值、SOD活力与H/R组相接近(P>0.05),却较EGb160组明显降低(P<0.01);MDA含量、Eh GSH/GSSG与H/R组相接近(P>0.05),但比EGb160组明显升高(P<0.01)。(2)实时荧光定量PCR及WB示:与Con组相比,H/R组Keap1 m RNA与蛋白表达均明显下降(P<0.05)。与H/R组比较,EGb40、EGb80以及EGb160组Keap1 m RNA与蛋白表达均显著下降(P<0.01),呈浓度依赖性,且组间差异明显(P<0.01)。ATRA组Keap1 m RNA与蛋白的表达较EGb160组无明显差异(P>0.05),却比H/R组明显下降(P<0.01)。与Con组相比,H/R组Nrf2、GCLC和GSTP1 m RNA与蛋白表达均明显上升(P<0.05)。与H/R组相较,EGb40、EGb80以及EGb160组Nrf2、GCLC和GSTP1 m RNA与蛋白表达均显著上升(P<0.05),呈浓度依赖性,且组间差异明显(P<0.01)。ATRA组Nrf2、GCLC和GSTP1 m RNA与蛋白的表达较EGb160组明显下降(P<0.01),却较H/R组无差异(P>0.05)。结论(1)Keap1/Nrf2/ARE通路的改变可能参与了大鼠心肌细胞在H/R过程中遭受氧化应激损伤的病理生理机制。(2)EGb通过上调抗氧化酶的表达以及增强抗氧化酶的活力达到其衰减由H/R诱导的心肌细胞氧化损伤。(3)EGb可能通过Keap1/Nrf2/ARE通路发挥保护心肌细胞抗H/R所致氧化损伤的作用。