【摘 要】
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第一部分 人HT基因在猪细胞的表达 目的 运用分子生物学和基因工程技术构建含人α1,2岩藻糖苷转移酶（HT）基因的重组质粒pcDNA3-HTcDNA并在猪细胞表达,合成H抗原,同时降低异种抗原α-Gal的表达。方法 用Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切pRc/CMV-HTcDNA和pcDNA3质粒,将切下来的HTcDNA定向连接在pcDNA3质粒,构建pcDNA3-HTcDNA重组质粒,对其进行
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第一部分 人HT基因在猪细胞的表达 目的 运用分子生物学和基因工程技术构建含人α1,2岩藻糖苷转移酶（HT）基因的重组质粒pcDNA3-HTcDNA并在猪细胞表达,合成H抗原,同时降低异种抗原α-Gal的表达。方法 用Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切pRc/CMV-HTcDNA和pcDNA3质粒,将切下来的HTcDNA定向连接在pcDNA3质粒,构建pcDNA3-HTcDNA重组质粒,对其进行PCR、多酶切和测序鉴定。建立猪主动脉内皮细胞原代培养、猪髂动脉内皮细胞（PIEC）系和猪肾PK-15细胞系传代培养的方法。采用脂质体转染法将pcDNA3-HTcDNA转染上述猪细胞,新霉素（G418）筛选具有抗性的细胞克隆,用PCR检测重组HT基因的整合,RT-PCR检测重组HT基因mRNA的表达,流式细胞术（FCM）检测转染细胞H抗原和异种抗原α-Gal的表达。分别以未转染的相应正常猪细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为对照。结果 重组质粒转染3种猪细胞经筛选均得到抗性细胞克隆,PCR扩增出人HT基因片段,RT-PCR证实人HT基因mRNA在猪细胞表达,FCM检测转染细胞H抗原表达升高,α-Gal表达明显降低。结论 转移的重组人HT基因可以在猪细胞表达,合成H抗原,同时降低异种抗原α-Gal的表达。选用巨细胞病毒（CMV）启动子可以使人HT基因在各种猪细胞广泛表达。 第二部分 转人HT基因猪动脉内皮细胞抗异种移植排斥功能试验 目的 探讨转人HT基因猪动脉内皮细胞抗异种移植排斥反应的作用和机制。方法 1.将转人HT基因的猪动脉内皮细胞和正常内皮细胞分别与20%、40%和60%等不同浓度的人血清孵育2小时,采用非放射性细胞毒性分
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