橡胶草响应茉莉酸的蛋白质组学研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:baimeimei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【目的】利用蛋白质组学技术中的双向电泳凝胶技术,建立橡胶草叶片蛋白质的双向电泳凝胶体系。研究外源使用茉莉酸甲酯(MeJA)对橡胶草(Taraxacum kok-saghyz Rodin,TKS)蛋白质的诱导效应,比较分析处理后的蛋白质表达图谱,初步探寻部分蛋白的功能,为从蛋白分子水平提供实验基础和方法指导,并为后续橡胶草其他部位的蛋白质组学及代谢蛋白质组学的研究奠定基础。【方法】通过对蛋白质样品的制备方法的筛选、上样量的确定、凝胶染色方法以及IPG胶条的pH范围等几个体系条件的优化,建立适合于橡胶草的双向电泳体系。以三月生的橡胶草叶片为材料,叶面喷施浓度为0.4 mmol·L-1 MeJA处理0小时和24小时后提取叶片蛋白质进行双向凝胶电泳。通过对不同处理条件下的双向电泳图谱进行比较,选择差异表达的蛋白进行质谱鉴定,分析差异蛋白的功能。【结果】(1)改良TCA-丙酮法提取橡胶草叶片总蛋白是最优方法。通过用TCA-丙酮法、改良TCA-丙酮法、酚-乙酸铵沉淀法、Tris-HCl浸提法、直接提取法五种蛋白提取方法所制备的蛋白质样品,比较五种不同的提取方法对蛋白质浓度、蛋白质提取率的影响,以及SDS-PAGE图谱的分析,选择Tris-HCl浸提法、酚-乙酸铵沉淀法和改良TCA-丙酮法进行2-DE电泳。对三种不同提取方法的双向电泳效果进行比较,最终确定以改良TCA-丙酮法提取橡胶草叶片总蛋白质效果最佳,并进行进一步的双向电泳实验。(2)通过对不同蛋白上样量、不同凝胶染色方法和不同胶条pH范围的比较,确定17cm(线性,pH 3-10)胶条,1200μg的上样量并进行考马斯亮蓝染色为最优条件。在此条件下,可以得到蛋白点较多的双向电泳图,并且与质谱技术兼容。(3)采用优化的双向电泳方法,对MeJA处理0小时和24小时的橡胶草叶片蛋白质组进行了差异分析,结果表明出现了有20个差异蛋白点,其中15个蛋白点表达量上升,5个蛋白点表达量下降。选取10个蛋白点进行蛋白质质谱鉴定,结果表明这些蛋白包括有果糖-1,6-二磷酸醛缩酶、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基、乌头酸酶等。【结论】本实验建立了适于橡胶草叶片蛋白质组学分析的样品提取方法和双向电泳体系。通过对MeJA处理0小时和24小时的蛋白质表达图谱比较分析,确定差异蛋白点,经质谱检测,数据库搜索初步分析了部分差异蛋白的功能,为橡胶草叶片蛋白质组学的研究提供了一定的技术支持,可为橡胶草资源的合理开发利用奠定理论基础。
其他文献
随着现代信息社会的飞速发展,无线通信和现代社会的信息化渗透了人们生活的每一个角落。同时也伴随着新的问题出现,即无线通信过程中的能耗过高,碳排放量不断增加,导致温室效
随着互联网的普及和新闻媒体的发展,媒体在资本市场中的作用愈加得到重视。本文通过对国内外相关文献的阅读,对媒体含义、媒体常用数据库、度量方法以及指标构造进行了整理,
使用套管扶正器,可减少套管磨损,使套管居中,提高固井质量。文中介绍了API规范的套管扶正器:弓型弹簧扶正器、螺旋弹簧扶正器、钢性套管扶正器、带涡流片套管扶正器、尾管扶
相对论流体力学模拟是研究相对论重离子碰撞中产生的热密物质随时空演化的重要方法之一。这种方法需要将强相互作用物质的状态方程作为计算的输入参数。当前人们采用许多不同版本的强相互作用物质的状态方程来作为相对论流体力学计算的输入。本文介绍了由强子共振气模型(HRG)在低温下得到的量子色动力学(QCD)状态方程,及由格点QCD计算在连续极限下得到的较高温的QCD状态方程。本文利用强子共振气模型计算了奇异介子
针对新型物流业态中出现的路径优化问题,建立了一类具有不同起点和不同终点的带时间窗取送货问题模型.根据模型特点,设计了一类大邻域搜索算法对大规模问题进行求解.该算法引
通过在不同应力水平下对岩石试样的加载-卸荷实验,对岩石试件在不同应力状态下受到“加载-卸荷”扰动时的声发射特征进行了试验研究.结果表明:在较低的应力水平下,岩体在受到
RACK1蛋白作为一种重要的支架蛋白广泛存在于哺乳动物和其它生物中,但迄今为止植物中RACK1蛋白的功能以及与之相互作用的蛋白却知之甚少。本试验利用拟南芥六种单突变体和双
研究目的:血小板是癌症生长时期全身和局部反应的中心因子。血小板通过转移癌症相关的生物分子来影响癌细胞,同时导致了这些癌症相关的生物分子在血小板中的富集,其中包括RNA。基于此,本研究使用二代测序技术对健康体检者与肺癌患者的血小板RNA进行测序,筛选其差异表达基因,并对其进行验证,为以后在肺癌诊断中的应用打下基础。研究方法:第一部分研究收集健康体检者5例、肺癌患者7例,每组各例分别采取外周静脉血6m
近年来,随着经济水平的不断提升,安防行业蓬勃发展。为满足大众对于家庭安防日益增长的需求,各类产品已涌入普通消费者市场。目前看来,典型的安防产品如视频监控,功能相对单
我国竹类资源分布广泛,数量丰富。如何以竹子替代木材去进行活性碳生产以制备改性竹炭去满足化工环保行业的材料需要变的迫在眉睫,而如何生产竹炭,生产出来的竹炭性能如何,可