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目的:(1)检测癌干细胞标志物CD44、CD133在41例不同病理分级舌鳞状细胞癌及47例不同病理分型涎腺腺样囊性癌患者癌组织中的表达情况,研究以上标志物表达程度的高低与舌鳞状细胞癌及涎腺腺样囊性癌病理表现的相关性。(2)建立舌鳞状细胞癌及涎腺腺样囊性癌耐顺铂株及高致瘤株。检测耐顺铂株、高致瘤株的生物学特性,并研究耐顺铂细胞、高致瘤细胞癌干细胞标志物CD44、CD133表达情况,探讨耐顺铂细胞、高致瘤细胞与癌干细胞的关系。方法:(1)免疫组化方法检测不同病理分级舌鳞状细胞癌及不同病理分型涎腺腺样囊性癌患者癌组织中癌干细胞标志物CD44、CD133的表达。(2)以涎腺腺样囊性癌ACC—M细胞株和舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系为实验对象,采用间歇性给予顺铂,单一剂量,体外连续诱导培养,诱导耐药性。双层软琼脂克隆形成法筛选增殖能力较强的细胞,连续克隆筛选3次,建立高致瘤株;(3)MTT法检测顺铂诱导细胞与亲本细胞的耐顺铂浓度(IC50);免疫细胞化学检测顺铂诱导细胞、琼脂克隆细胞与亲本细胞爬片耐药蛋白MRP及肿瘤干细胞标志物CD44、CD133的表达;流式细胞仪检测顺铂诱导细胞、琼脂克隆细胞与亲本细胞的凋亡率;(4)建立裸鼠动物模型;TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,免疫组化法检测移植瘤PCNA、CD44、CD133的表达。结果:1、41例舌鳞状细胞癌标本中病理分级为高分化的22例,中—低分化的19例,47例涎腺腺样囊性癌中腺样型-管状型32例,实性型15例。舌鳞状细胞癌各病理分级及涎腺腺样囊性癌各病理分型病例均有CD44、CD133的阳性表达,但CD44、CD133在舌鳞状细胞癌各病理分级组间及涎腺腺样囊性癌各组织学类型间表达强度差异无统计学意义。(p>0.05)。2、获得了耐顺铂能力较Tca8113细胞和Acc—M细胞高的耐药细胞Tca8113/DDP和Acc-M/DDP,Tca8113、Acc—M顺铂IC50为5.14、5.23(单位:微克),Tca8113/DDP和Acc-M/DDP顺铂IC50为12.85、13.32(单位:微克),分别是亲代细胞的2.5倍和2.54倍。获得了增殖能力较强的Tca8113/agar、Acc—M/agar细胞,与各自亲代细胞克隆形成率差异有统计学意义。3、以Tca8113/DDP、Tca8113/agar细胞为实验组1和实验组2,未经诱导的亲本Tca8113细胞为对照组,以灰度值反映细胞爬片中CD44、CD133、MRP抗原阳性反应强度。组间比较显示实验组1和对照组CD44、CD133、及MRP的表达差异有统计学意义,实验组2与对照组在CD44、CD133表达上差异有统计学意义,MRP表达差异无统计学意义;以Acc—M/DDP、Acc—M/agar为Acc实验组1和Acc实验组2,未经诱导的亲本Acc—M为Acc对照组,组间比较显示实验组和对照组各指标表达差异均有统计学意义。4、Tca8113/DDP、Tca8113/agar、较亲本Tca8113细胞凋亡率低,差异有统计学意义;Acc—M/DDP、Acc—M/agar较亲本ACC—M细胞凋亡率低,差异有统计学意义。5、裸鼠体内实验表明,接种Tca实验组和Acc实验组细胞的裸鼠体内的移植瘤均较各自对照组生长快,处死后测量到瘤体体积较大(P<0.05)。实验组细胞所致移植瘤细胞凋亡率低,PCNA、CD44、CD133表达高,差异有统计学意义。结论:1、舌鳞状细胞癌及涎腺腺样囊性癌等口腔癌肿瘤组织中具有表达癌干细胞常用标志物CD44、CD133的阳性细胞,未发现癌组织中CD44、CD133阳性表达强度与舌鳞状细胞癌病理分级及涎腺腺样囊性癌的组织学分型有关。2、Tea8113/DDP、Tea8113/agar细胞及Acc—M/DDP、Acc—M/agar细胞具有一定的干细胞特性,增殖和抗凋亡能力较强。通过化疗药物体外筛选、双层琼脂克隆筛选可获得干细胞特性表达高的子代细胞。